雌黄(三硫化二砷)诱导HL60细胞凋亡与坏死的实验研究

雌黄(三硫化二砷)诱导HL-60细胞凋亡与坏

死的实验研究

【摘要】 目的 研究雌黄（As2S3）可否诱导急性粒细胞白血病细胞株（HL-60）凋亡与坏死。方式 以不同浓度的As2S3在不同的时刻处置体外培育的HL-60细胞株，应用细胞生长测定、形态学观看及流式细胞仪检测等多种方式，在体外研究As2S3对HL-60细胞凋亡和增殖抑制的作用。通过对细胞进行Annexin V和碘化丙锭（PI）双重染色，应用流式细胞仪能够区分活细胞、凋亡细胞与坏死细胞。结果 μmol/L As2S3作用18h后诱导HL-60小部份细胞凋亡和大部份细胞坏死，μmol/L As2S3作用8h后可引发HL-60细胞凋亡。结论 As2S3可诱导HL-60细胞凋亡与坏死，有必要进一步探讨其对急性粒细胞白血病医治的价值。

【关键词】 雌黄(三硫化二砷)；HL-60细胞；凋亡

Experimental study on As2S3 (Orpiment) induced apoptosis and necrosis of human leukemia cell line HL-60

【Abstract】 Objective The current study was designed to investigate whether As2S3(Orpiment) will induce apoptosis and necrosis of human acute myloid leukemia cell line HL-60. Methods Acute leukemia cell line HL-60 was used as in vitro model. HL-60

cell line was treated with As2S3 at different concentrations and different period，and cell growth was analyzed with trypan blue exclusion. Apoptosis was assessed with cell morphology （including microscope and electron microscope）and flow cytometry，the latter can distinguish live cell，apoptotic cell and necrotic cell through double staining of Annexin V and propidium iodide，of which fluorescent intensities were measured on flow μmol/L of As2S3 could induce most of cell HL-60 necrosis and a small part of cell apoptosis within 18h，μmol/L As2S3 could induce apoptosis of human leukemia cell line HL-60 within 8 It is necessary to study further the therapeutic value of As2S3 on acute myloid leukemia. Since it can induce apoptosis and necrosis of HL-60 cell.

【Key words】 As2S3 (Orpiment)；HL-60 cell；Apoptosis

最近几年来对急性早幼粒细胞白血病（APL）的医治方面的有关研究取得了重大进展，全反式维甲酸、三氧化二砷和复方青黛片（要紧成份为As4S4）对APL医治均有较高完全减缓率，尤其后二者对APL医治作用，主若是通过凋亡来实现的［1］，因此诱发细胞凋亡已成为白血病医治的新思路。本研究旨在进一步探讨中药雌黄(又称黄砷，要紧成份为As2S3)在体外对急性粒细胞性白血病细胞株HL-60的凋亡与

坏死作用。

1 材料与方式

制剂 As2S3（上海化学试剂公司）配成500μmol/L的贮存液，过滤灭菌，4℃寄存备用，临用前稀释成所需浓度。

细胞培育及细胞生长状况测定 HL-60细胞（由江苏省血液研究所陈子兴教授惠赠）细胞以2×105/ml接种于RPMI1640培育液（10%胎牛血清，100U/ml青霉素和100mg/ml链霉素）中培育（37℃、5%CO2）。加药后逐日取药物处置组与对照组细胞台盼蓝染色，光镜下计数活细胞总数持续6天，绘制生长曲线。

细胞形态观看及流式细胞仪测定 培育细胞经μmol/L As2S3孵育一按时刻后搜集2×106细胞PBS洗2遍，1500r/min离心5min，弃上清，4℃2%戊二醛固定72h后，1%锇酸固定，梯度脱水，EPON-812包埋，超薄切片，铀和铅双重染色后透射电镜下观看。Annexin-V标记 按Immuno-tech公司的说明书进行，1×106细胞用冰PBS洗2次，调整细胞浓度为1×106/ml，加5μl Annexin V（1：10稀释）和5μl碘化丙锭（PI）（250μg/ml）于490μl细胞悬液中，放置冰浴10min，用流式细胞仪(型号COULTER EPICS-XL)分析细胞凋亡情形。