miR-522在肝细胞肝癌中的表达及临床意义
苗志龙1，施育华1*，刘小兵1，浦立勇2
【摘 要】[摘 要] 目的：探讨在肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）中micro RNA-522（miR-522）表达对临床及预后的意义。方法：收集85例肝癌组织及癌旁组织标本，采用实时荧光定量-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测miR-522在这些组织中的表达变化，并结合临床病理资料分析该分子在肝癌中的临床意义以及对预后的影响。结果：与癌旁组织相比，miR-522在肝癌组织中表达增高，且miR-522的表达与肝癌的TNM分期（P=0.005）及肿瘤分级（P=0.009）有关，此外，miR-522的表达与患者的总生存率有明显的相关性。相关性分析表明miR-522可以作为一个独立提示预后的因素。结论：在肝细胞肝癌患者中过表达的miR-522可能是一个与生存预后相关的生物标记物。
【期刊名称】南京医科大学学报（自然科学版） 【年(卷),期】2018(038)012 【总页数】3
【关键词】[关键词] 肝细胞肝癌；微RNAs；预后 [基金项目] 盐城市医学科技发展项目（YK2016061）
肝癌是最常见的恶性肿瘤之一，具有高发病率及病死率，每年约有25万患者死于肝癌[1]。虽然越来越多的方法诊断治疗肝癌，但肝癌的5年生存率仍然不令人满意。为了提高肝癌患者的生存率，研究者们不断发现一些新颖的分子靶向治疗方法。微小RNA是一类非编码RNA，参与许多基因代谢活动，如增殖、凋亡、侵袭、转移，也包括最原始的肿瘤发生发展进程[2]。越来越多的证据把
它在癌和抑癌复杂的基因改变联系在一起。并且，很多研究开始注意到异常突变的小干扰RNA涉及到人类很多肿瘤进程，也包括肝脏肿瘤[3]。研究发现过表达的miR-21及miR-183能促进肝癌细胞的生长及侵袭[4]。而低表达miR-148b在肝癌中可以表示一个不良的预后[5]。这些研究提示miRNA可能在肝癌发生发展中扮演重要角色。
有学者发现miR-522作为一个肿瘤促进因子可以通过调控DKK1和SFRP2来实现[6]，但到目前为止，在肝癌中miR-522的预后价值仍没有相关报道，本文主要关注它在肝细胞肝癌发生发展中的作用及其对肿瘤预后的意义。
1 对象和方法
1.1 对象
选自2008年5月—2014年7月本院接受肝细胞肝癌局部解剖性切除手术治疗的肝细胞肝癌患者的肿瘤组织及远端对照正常组织（距癌组织≥5 cm）。年龄在29～78岁，所有患者在手术前均未接受过放化疗或肿瘤方面的任何治疗。共收集85例标本，其中，男45例，女40例，所有的离体标本在手术后0.5 h内立即冰封及储存在液氮装置中。根据肝细胞癌组织分类标准分别记录患者的临床病理指标，包括性别、年龄、肿瘤分化程度、TNM分期和甲胎蛋白（AFP）水平。所有患者均签订知情同意书，所有研究均通过伦理委员会审核。
TRIzol试剂、PCR扩增试剂盒（Invitrogen公司，美国），2XEasyTaq PCR SuperMix（北京中山金桥生物技术有限公司），DNA marker、TBE 5X 缓冲液（上海生工生物工程有限公司），内参U6及miR-522特异RT-PCR引物（华大基因科技有限公司合成）。 1.2 方法
按照试剂说明书对肝癌组织及相应癌旁正常组织进行总RNA提取。逆转合成cDNA。用实时PCR方法定量分析小RNA。反应条件为：95℃10 s、57 ℃ 20 s、72 ℃ 15 s，扩增40个循环。以U6小核RNA作为内参，所有反应均设立3个复孔，取平均值。记录每个反应管中的荧光信号到达所设立的阈值时所经历的循环数即Ct值，以U6作内参，ΔCt=[Ct（miR-522）-Ct（U6）]，分别计算肝癌组织及相应癌旁组织中的miR-522的相对表达量。 1.3 统计学方法
全部数据均采用SPSS19.0统计分析软件进行分析。计量资料以均数±标准差（±s）表示，肝癌组织与相应癌旁组织中表达采用配对t检验。Pearson法进行相关性分析；Kaplan-Meier法绘制患者的生存曲线，并进行log-rank检验；COX回归模型对影响患者生存的各因素进行多因素分析。P≤0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 miR-522在肝细胞肝癌及癌旁组织中的表达
用RT-PCR法检测miR-522在85例肝癌及癌旁组织中的表达情况。结果显示，肝癌中miR-522的表达显著高于癌旁组织，差异有统计学意义（P＜0.01，图1），表明在肝癌中miR-522是一个促癌基因。 2.2 miR-522表达与肝癌各病理参数间的关系
miR-522的表达与肝细胞肝癌各临床病理参数的关系结果见表1，统计学分析显示miR-522的表达与肝癌的TNM分期（P=0.005）及肿瘤分级（P=0.009）有关，肿瘤恶性程度越高miR-522的表达越多，但miR-522的表达与其他临床病理参数如患者的年龄、性别及肿瘤大小等无关。多因素分析结果显示miR-
miR-522在肝细胞肝癌中的表达及临床意义
