一种建立大鼠动脉硬化模型的方法
张 宪 陈 阳
【摘 要】【摘要】目的利用大剂量维生素D3注射和高脂喂养结合的方法建立大鼠动脉粥样硬化（AS）模型。方法6周龄雄性SD大鼠腹腔注射维生素D3，高脂饲料喂养大鼠。连续监测大鼠不同时间段的血脂水平、血液生化指标以及其病理变化。结果①AS模型组的TC、TG、HDL、LDL、血钙（Ca2+）显著高于正常对照组。②HE染色，模型组大鼠的主动脉内膜下可见巨噬细胞及钙沉积，内弹力膜断裂，少量斑块沉积，而正常大鼠无病变的产生。结论该方法能够诱导大鼠高脂血症症状的发生，并逐渐在动脉内膜下形成粥样斑块，大鼠动脉硬化模型可成功建立。 【期刊名称】中国医药指南 【年(卷),期】2015(000)003 【总页数】2
【关键词】【关键词】动脉粥样硬化；模型；大鼠；病理学
动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是一种病因复杂的慢性疾病，其以脂质代谢紊乱、血管内皮细胞受损、炎性细胞浸润、斑块破裂和血栓形成为基本特征，为心脑血管疾病重要的病理基础。然而对其病因、发病机制和防治的研究有赖于动物模型。有用兔、小型猪、鼠、猴等动物建立动脉粥样硬化病理模型的报道[1-4]。本实验利用大剂量维生素D3腹腔注射与高脂饲料喂养相结合的方法，建立了操作简便、重复性好的大鼠AS模型，为AS发病机制阐明和心脑血管疾病的预防创造条件。
1 材料与方法
1.1 实验动物：实验SD大鼠由南通大学实验动物中心提供，许可证号为：普通级SCXK（苏）2008-0010，于恒温（24±1） ℃及湿度为（42 ±5）%的条件下，每笼1只，共80笼，24 h自由摄水，两组动物实验在6周龄的SD大鼠上进行，实验前采血测定动物的血脂及血钙水平。
1.2 实验试剂：维生素D3注射液（上海通用药业股份有限公司）、胆固醇干粉（普博欣生物科技有限公司）、胆酸钠（北京化学试剂公司)、猪油和白糖（江苏省协同生物医药有限责任公司）、丙基硫氧嘧啶（北京红惠生物制药股份有限公司）。
1.3 建立动物模型：70只6周龄SD雄性大鼠适应性喂养1周后，随机分为2组(正常组30只和模型组40只)：正常组给予普通饲料；模型组的大鼠通过腹腔注射维生素D3注射液（60万U/kg），每隔1天1次，共3次同时给予高脂饲料喂养(4%胆固醇、0.5%胆酸钠、10%猪大油、5%白糖、0.2%丙基硫氧嘧啶，80.3%的基础饲料)。并定期喂以瓜子和杂食，改善其肠胃功能，增强抵抗力。喂食每次10 g，每天2次，自由饮水。
1.4 生化指标测定：适应性喂养1周后，于不同时间段用大鼠尾静脉取血法采血1 mL，采用全自动生化分析仪(日立7600)测定血清总胆固醇(total cholesterol，TC)、三酰甘油(triglyceride，TG)、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白(LDL)、血钙（Ca2+）水平。
1.5 病理组织学检查：于高脂喂养后第9周分别在正常组及模型组随机抽取5只大鼠，用1%戊巴比妥钠对大鼠进行麻醉，取完整主动脉(从主动脉根部至髂总动脉分叉处)，用10%甲醛固定主动脉，对其进行石蜡包埋连续切片，HE染色，光镜下观察主动脉内膜变化。
1.6 统计学方法：数据以()表示，所有统计工作均在SPASS17.0统计软件包内进行。采用t检验分析。P＜0.05具有统计学意义
2 结 果
2.1 不同阶段大鼠血脂、血钙水平变化：大鼠高脂喂养前1 d、21 d后、42 d后各采一次血，采血前禁食12 h。63 d后处死动物，处死前禁食12 h，颈动脉取血放于离心管中，取血前向离心管中加入枸橼酸钠抗凝，血液经3000 r/min离心10 min，用于生化测定。所测血脂情况见表1。模型组动物血脂(TC、TG、HDL、LDL)及血钙（Ca2+）水平明显升高(P＜0.05)。
2.2 主动脉切片HE染色：大鼠主动脉切片HE染色结果见图1，光学显微镜下模型组主动脉内膜下可见巨噬细胞及钙沉积，内弹力膜断裂，少量斑块沉积，而正常组主动脉内膜光滑，内弹力膜完整，中膜平滑肌细胞排列规整。
3 讨 论
动脉粥样硬化与人类心脑血管疾病密切相关，对心脑血管疾病的病因、发病机制以预防的研究离不开动物模型的建立，国内外学者报道有用兔子建立动脉粥样硬化模型，用高脂喂养的方法，8～12周可在兔动脉内见脂质条纹，约45周可形成成熟动脉粥样硬化[5]。Abela GS[6]对新西兰白兔行球囊损伤主动脉加高脂饲养的方法，12周产生严重的动脉粥样硬，后经组胺诱发斑块破裂，成功建成不稳定斑块破裂模型。然而兔是食草动物，其饮食习惯与人类大不相同，其产生的斑块与人类的动脉粥样硬化斑块区别甚大。Schneider J.E等[2]也对猪冠状动脉用球囊损伤的方法成功建立动脉粥样硬化模型。但是猪体积大，用于动脉硬化模型的建造不便于操作，且成本高。大鼠尽管具有一定的抗AS特性，但它用于模型实验动物，饲养方便，成本低，生存能力强，病死率较低。
一种建立大鼠动脉硬化模型的方法
