siRNA沉默POLE2基因表达对非小细胞肺癌细胞增殖的
影响
李娜苗;张莹莹;范亚莉;赵钰玲;董娅;白洁;李建英
【期刊名称】《现代肿瘤医学》 【年(卷),期】2019(027)001
【摘要】目的:构建DNA聚合酶εB亚基(POLE2)基因重组慢病毒载体,并检测其在非小细胞肺癌(NSCLC)中的功能.方法:RT-PCR技术检测POLE2基因在A549、NCI-H1975、NCI-H1299细胞中的表达.设计并合成针对POLE2 siRNA靶序列的寡核苷酸单链,退火、酶切后产生GV115-shPOLE2慢病毒载体.该载体含有绿色荧光蛋白(GFR),经聚合酶链式反应(PCR)筛选出阳性克隆并测序鉴定.将GV115-shPOLE2、Helperl.0、Helper2.0质粒共感染包装293T细胞,包装成假病毒颗粒并感染非小细胞肺癌A549细胞,经免疫印迹法(Western blot)检测筛选POLE2 siRNA有效靶点,从而进行细胞功能学实验.CCK-8法检测POLE2基因沉默对于细胞增殖能力的影响;克隆形成实验检测POLE2基因沉默对细胞克隆形成能力的影响;Casepase3/7检测POLE2基因沉默对细胞凋亡的影响.结果:RT-PCR结果证实POLE2基因在三株细胞中表达丰度均为高表达.PCR和测序结果显示,GV115-shPOLE2慢病毒载体构建正确,经Western blot法证明POLE2 siRNA对于POLE2的外源表达有明显沉默作用,是有效靶点.慢病毒转染A549细胞后细胞增殖明显减缓,细胞克隆数减少,凋亡细胞数增多,与转染阴性对照病毒的A549细胞组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:RNAi技术沉默POLE2基因表达后,POLE2 siRNA明显抑制了非小细胞肺癌细胞的增殖. 【总页数】6页(35-40)
siRNA沉默POLE2基因表达对非小细胞肺癌细胞增殖的影响
