南京农业大学动科繁殖新技术茆达干重点总结

由天下分享时间：2024/9/14 2:28:28 加入收藏我要投稿点赞

茆达干繁殖新技术的重点内容有些答案有出入有些PPT上没有是我网上找的大家还是以PPT为主仅供参考

细胞因子（cytokine，CK）：是指由免疫细胞和某些非免疫细胞经剌激而合成、分泌的一类具有生物学效应的小分子蛋白物质的总称。 CK 能调节白细胞生理功能、介导炎症反应、参与免疫应答和组织修复等，是除免疫球蛋白和补体之外的又一类免疫分子。

肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)：是一类能引起肿瘤组织出血坏死的细胞因子，分为TNF-α和TNF-β两类。前者主要由单核/巨噬细胞产生，又称恶病质素；后者主要由活化T细胞产生，又称淋巴毒素。

血睾屏障(blood-testis barrier，BTB）相邻的支持细胞基底部、血管内皮基膜、结缔组织和曲精细管基膜牢固紧密连接组成的屏障结构，可防止精子与免疫系统接触。

生殖免疫技术的应用：1、激素测定2、发情、排卵鉴定3、性别控制4、早期妊娠诊断5、免疫去势6 诱导发情、超数排卵7、胚胎分割激素测定

? RIA（定义）: 放射免疫技术为一种将放射性同位素测量的高度灵敏性、精确性和抗

原抗体反应的特异性相结合的体外测定超微量（10-9～10-15g）物质的新技术。关键点：酶高效催化性能抗原抗体特异性微量活性物质

? EIA（定义）通过固相载体与酶标记的抗原抗体结合来进行激素测定的方法。 ? 荧光免疫测定 ? 化学发光免疫测定

抗体的制备

1 单抗的制备杂交瘤技术将B细胞与能长期生存、不断繁殖的细胞（瘤细胞）杂交（融合）。 2多抗

制备多克隆抗体的条件：免疫原、佐剂、用于免疫的动物免疫原的要求：

1免疫原性：用特异免疫球蛋白的形成或致敏淋巴细胞的产生来衡量。 2反应原性：被特异免疫球蛋白识别从而被结合的能力。

3完全抗原：可与抗体结合产生沉淀反应，而半抗原则不能，但却能抑制沉淀反应（抗体的结合位点已被封闭）。

流程：1免疫原与佐剂的乳化 2初次免疫 3 加强免疫 4 血液收集

抗体类型类型：A、D、E、G、M、Y、N 哺乳动物的抗体 IgG 80%（老龄动物），各亚类对蛋白酶的敏感性不同禽类抗体含量最多的是IgY

抗体的产生 1致敏阶段 2反阶段3效应阶段免疫耐受

? 免疫耐受是机体对抗原刺激表现为“免疫不应答”的现象 ? 免疫耐受具有免疫特异性

? 自身耐受可以避免自身免疫病的发生

免疫耐受引起的因素：抗原剂量抗原类型细胞类型免疫途径免疫对象

激素免疫

主动免疫：激素作为抗原免疫，刺激机体产生抗体（多次）

被动免疫：激素抗体免疫动物，使其与体内相应的激素发生特异性结合。（一次）

抑制素免疫

抑制素：性腺分泌的糖蛋白质激素，在雌性动物主要产生于卵巢的颗粒细胞。

作用：INH可以选择性地抑制垂体FSH的分泌，从而影响动物的内分泌调控，参与优势卵泡的选择，调节卵泡的发育，参与精子的发生。 INH合成天然抑制素、抑制素合成肽、重组抑制素

雌激素免疫原理：雄烯二酮是合成雌激素的前体。因此，以雄烯二酮免疫母羊产生的抗体与内源性雄烯二酮发生免疫反应，使合成雌激素的前体物质浓度大大降低，雌激素合成减少，外周血液中雌激素水平降低，解除对下丘脑和垂体的抑制作用，刺激卵泡发育，最终导致排卵数增加。基因免疫：用一定的方法将带有目的基因的表达载体转化到动物体内，其表达产物经抗原递呈，诱导机体产生特异性抗体并引起相应免疫应答的技术基因免疫作用：激活细胞免疫与体液免疫

转基因动物：用实验室方法将所需要的目的基因导入动物的受精卵，使外源基因与动物本身的基因整合在一起，在动物发育过程中表达，并能稳定地遗传给后代的技术。这种在基因组中稳定地整合有人工的外源基因的动物称转基因动物

基本程序：

1表达载体的构建(上游) 2外源基因的导入(中游) 3外源基因活性的检测(下游) 4转基因动物家系的建立和扩繁

外源基因的导入(中游) 方法：

1原核注射法借助显微操作仪，将外源基因直接注入单细胞受精卵的原核中。

2逆转录病毒感染法 RNA病毒感染宿主细胞后，逆转录成相应的DNA，并整合到宿主的染色体DNA上，得到转基因动物

3胚胎干细胞介导法将外源基因导入ESC，阳性细胞植入正常发育的囊胚腔或与早期卵裂隙球孵育，获得嵌合体胚胎再进行移植；或作为供体核进行核移植。 4精子载体法

5生殖细胞转染法在原理和方法上与ESC技术相似，在制作转基因家禽方面有明显的优势。 6细胞核移植法体外培养的体细胞经外源DNA转化后，通过筛选可获得阳性细胞，作为核供体，通过体细胞核移植技术，可直接获得转基因动物。

转基因动物的生产研究：改良生产性能抗病育种

用作生物反应器生产昂贵药物组织、蛋白人源化

基因治疗

建立人类疾病模型基因的研究