玻璃水晶 预防医学技术微生物检验 第十一、十二章总结
十一章 常用仪器设备使用
1.《实验室生物安全通用要求》GB 19489-2004 将危害程度分为4级:
Ⅰ到Ⅳ,低到高。
Ⅰ低个体,低群体,不致病;
Ⅱ中 有限 不严重,传播有限; Ⅲ高 ,低群体,不因偶然传播;
Ⅳ高 ,高群体,严重疾病,不能治愈,人畜共患。 2.生物安全的防护水平(BSL)分为4级,Ⅰ到Ⅳ,低到高。 用BSL-1\\2\\3\\4,表示。
3.生物安全防护屏障包括2级,一级,生物安全柜+个人防护装备 二级,设施结构和通风系统
4.计量器具需经 计量部门检定 合格方能使用。使用前后有 使用人 和 保管人 签字。
5.贵重仪器应有 专人 保管,定期 检查 保养 检修 校正,有记录。各种仪器,使用后旋钮复归原位,并切断电源。
6.超净台:洁净度可达百级。包括 水平式 和 垂直式,只保护样品无法保障环境和操作人员。
7.生物安全柜:保护样品和人员及环境。分一级:不护样品,护人和环境 二级:样品,人,环境均保护(最广泛) 三级:柜体气密,手套操作,(高风险4级实验室) 生物安全柜操作注意:缓慢移动,平行摆放,避免震动,低污染向高污染移,尽量不用明火(可用本生灯)。
8.普通培养箱:隔水式(内部温度均匀、首选) 和 直热式(不均匀);
低室温时,可用于 真菌 培养,但 细菌 和 真菌 不可在同一培
养箱内培养。
温度不稳定时,检查 温度控制器接点 或 请专人检修。 早晚应观测温度,记录,定期消毒。
9.真菌培养箱:高气温地区培养 霉菌 酵母菌。室温高于35°时,可用培养细菌。
无碰探头,早晚观测,定期消毒。 10.恒温震荡培养箱:微生物
摆放地面 平整 后有 散热空间。
移动设备,任意方向不大于 45度。
制冷状态下,每隔 两周/次 做加热驱潮。
11.厌氧培养箱:H气瓶应另放安全处,开培养罐门,将接种好的培养物放入罐内并迅速放入 催化剂钯粒,干燥剂,亚甲基蓝指示剂,关闭门并扭紧。开电磁阀开关,真空泵开关,抽气至93.3KPa,关真空泵。开N2输气阀,再开N瓶和减压阀,关N气,开真空泵抽气,再用N气充一次。第三次:8N2H2CO2 充气,待指针回零关输气阀,再关减压阀、电磁阀。 不可出现负压
12.离心机:普通、高速(细胞器及细菌分离制备)、
超速、超高速(病毒质粒核酸Pr分离纯化)
13.天平:需预热1h,开启显示器,用砝码时需带手套和镊子,精确度,
千分之一,0.001
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14.分光光度计:放臵地点,避免阳光直射,强磁场,大功率共用设备,远离水池,干燥剂应定期更换。
校准:等热平衡后,校准0,100,换挡重调。
15.酶联免疫检测仪:灵敏度高,特异性强,操作简单,重复性好,检样迅速,
费用少
关机5秒内不立即开机,保证交流电压稳定。更换滤光片前,先关机,换后开机运行,走纸时按键操作,不可手拉。防止被测液沾上探头滴到滤光片上。 16.显微镜:普光(200nm细菌和细胞)电子显微镜(0.2nm亚结构、病毒)
暗视野(0.04μm未染活标本、线粒体鞭毛运动)
荧光(暗室或远离窗口避免可见光干扰)二甲苯擦拭镜头。
17.高压蒸汽灭菌:压力到0温度降到50~60度。 18.电热恒温干燥箱:一般选择50-250度。
灭菌:开排气口排气后关排气口加热至160保持2h关电源,开排气口降至80度再开门。 干燥:80度
19.滤菌器:0.22μm材质:玻璃和金属,原理:负压和正压 20.冰箱:关掉10min后才可再次启动
21.超低温冰箱:-100度,可保存冻干菌种。空气过滤网至少1月一次。5min再次启动。
操作带干手套,以免冻伤,误将盛水的容器放入,早晚观测。 22.空气微生物采样器:
固体撞击、离心、气旋、液体冲击、过滤、大容量静电沉降。
23.电热恒温水浴箱:20-60度,先加(蒸馏)水在通电,
24.超声波清洗仪:原理,空化作用,不与不锈钢发生反应的液体均可做清洗剂。深度不低于5厘米,避免温度过高。
25.振荡器:开机前加蒸馏水,液体不超过容器的1/3;开机时速度应缓慢由低至高调节。长期不用,应将水放掉。
26.可直接加热的仪器:烧杯、三角瓶、试管、蒸发皿。
27.试剂瓶:磨口瓶:非强碱性和有机试剂;非磨口瓶,碱性或浓盐酸。 28.滴定管:0.2-0.1ml,微量滴定管精度为0.005ml。
蛋白质、核酸提取相关设备
29.提取蛋白及核酸:蛋白质,分离和纯化,(硫酸铵)盐析法; 核酸,分离和纯化,酚、氯仿抽提。
细菌外膜蛋白,超声波粉碎机,限制内切酶37度使用,-20度保存。 30.层析:1)凝胶过滤法(分子筛层析法)常用介质(葡聚糖)主要用于(蛋白
或核酸分离)
该法先洗脱大分子,再脱小分子。原理(凝胶形成多孔网状结构)。 2)离子交换层析,常用介质(纤维素)主要用于(分离纯化蛋白) 原理:纤维素或凝胶介质所带电荷不同。
31.检测设备:1)分光光度计,菌600;蛋白280;核酸260颜色反映450 石英比色皿用于紫外分光光度剂 玻璃 可见光
2)紫外透射仪,使用条件(暗室、紫外线) 紫外线下,看DNA条带
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3)色谱 气象色谱 微生物分类和鉴定,化学成分分析 液相色谱 微生物化学成分分析 质谱仪 微生物化学成分分析 4)测序仪 蛋白测序仪测定氨基酸排列顺序 DNA测序仪测核苷酸排列顺序
(可选用质粒、噬菌体、PCR产物)
5)扩增仪 可做PCR的仪器。 6)酶标仪 做ELISA的仪器。
ELISA反应设备包括(塑料凹孔板、洗板机、酶标仪)
32.电泳:类别,醋酸纤维膜电泳——免疫球蛋白鉴定 琼脂免疫电泳——蛋白分离和鉴定 对流免疫电泳——抗原,抗体 火箭电泳——测抗原量
交叉定量免疫电泳——测抗原量 IFE—等电聚焦电泳——蛋白质分离 PFGE—脉冲电泳——核酸分离
PAGE—聚丙酰胺凝胶电泳——蛋白和核酸分离
1)聚丙酰胺凝胶电泳,原理,凝胶介质形成立体多孔网状结构,
分子筛+电泳=上大分子,下小分子
过硫酸铵在PAGE制备中起催化聚合作用。 SDS-PAGE,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳——蛋白质分离 上大下小,丙烯酰胺浓度越大,线性分离范围越小, 十二烷基硫酸钠作用:解离蛋白, 染色剂:考马斯亮蓝、硝酸银;
缓冲液重要成分:甘氨酸 2)等电点聚焦电泳IFE 原理:两性电解质制造凝胶有不同PH,使不同电荷多肽在电泳条件下在等电点停留。用聚丙烯酰胺制备。
3) 脉冲电泳PFGE 正交交变脉冲电场,琼脂糖制备 靠近负极为大片段DNA 染色溴化乙锭(致癌)硝酸银 丙烯酰胺(神经毒素) 4)琼脂糖凝胶电泳——核酸分离纯化 水平电泳槽,200bp-50kb,入DNA是为测算DNA电泳带分子量。 5)聚丙烯酰胺电泳——核酸分离 垂直电泳槽,分离5-500bP的核酸
第十二章 实验室生物安全
1.实验室废弃物,须经过物理 高压灭菌 或 化学消毒 后才可离开实验室。 2.每年 进行一次压力容器安全和质量检测。
3.更换实验室及生物安全柜的高效过滤器前,须进行 甲醛熏蒸。 4.病原微生物实行双人双锁、使用审批制度。
5.相关实验室人员每年定期培训,对实验室污染状况使用频度进行定期监测。
卫生资格考试 预防医学技术 微生物检验 011 019 024等专业
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