玻璃水晶 预防医学技术微生物检验 第十一、十二章总结
十一章 常用仪器设备使用
1.《实验室生物安全通用要求》GB 19489-2004 将危害程度分为4级：
Ⅰ到Ⅳ，低到高。
Ⅰ低个体，低群体，不致病；
Ⅱ中 有限 不严重，传播有限； Ⅲ高 ，低群体，不因偶然传播；
Ⅳ高 ，高群体，严重疾病，不能治愈，人畜共患。 2.生物安全的防护水平（BSL）分为4级，Ⅰ到Ⅳ，低到高。 用BSL-1\\2\\3\\4,表示。
3.生物安全防护屏障包括2级，一级，生物安全柜+个人防护装备 二级，设施结构和通风系统
4.计量器具需经 计量部门检定 合格方能使用。使用前后有 使用人 和 保管人 签字。
5.贵重仪器应有 专人 保管，定期 检查 保养 检修 校正，有记录。各种仪器，使用后旋钮复归原位，并切断电源。
6.超净台：洁净度可达百级。包括 水平式 和 垂直式，只保护样品无法保障环境和操作人员。
7.生物安全柜：保护样品和人员及环境。分一级：不护样品，护人和环境 二级：样品，人，环境均保护（最广泛） 三级：柜体气密，手套操作，（高风险4级实验室） 生物安全柜操作注意：缓慢移动，平行摆放，避免震动，低污染向高污染移，尽量不用明火（可用本生灯）。
8.普通培养箱：隔水式（内部温度均匀、首选） 和 直热式（不均匀）；
低室温时，可用于 真菌 培养，但 细菌 和 真菌 不可在同一培
养箱内培养。
温度不稳定时，检查 温度控制器接点 或 请专人检修。 早晚应观测温度，记录，定期消毒。
9.真菌培养箱：高气温地区培养 霉菌 酵母菌。室温高于35°时，可用培养细菌。
无碰探头，早晚观测，定期消毒。 10.恒温震荡培养箱：微生物
摆放地面 平整 后有 散热空间。
移动设备，任意方向不大于 45度。
制冷状态下，每隔 两周/次 做加热驱潮。
11.厌氧培养箱：H气瓶应另放安全处，开培养罐门，将接种好的培养物放入罐内并迅速放入 催化剂钯粒，干燥剂，亚甲基蓝指示剂，关闭门并扭紧。开电磁阀开关，真空泵开关，抽气至93.3KPa，关真空泵。开N2输气阀，再开N瓶和减压阀，关N气，开真空泵抽气，再用N气充一次。第三次：8N2H2CO2 充气，待指针回零关输气阀，再关减压阀、电磁阀。 不可出现负压
12.离心机：普通、高速（细胞器及细菌分离制备）、
超速、超高速（病毒质粒核酸Pr分离纯化）
13.天平：需预热1h,开启显示器，用砝码时需带手套和镊子，精确度，
千分之一，0.001
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14.分光光度计：放臵地点，避免阳光直射，强磁场，大功率共用设备，远离水池，干燥剂应定期更换。
校准：等热平衡后，校准0，100，换挡重调。
15.酶联免疫检测仪：灵敏度高，特异性强，操作简单，重复性好，检样迅速，
费用少
关机5秒内不立即开机，保证交流电压稳定。更换滤光片前，先关机，换后开机运行，走纸时按键操作，不可手拉。防止被测液沾上探头滴到滤光片上。 16.显微镜：普光（200nm细菌和细胞）电子显微镜（0.2nm亚结构、病毒）
暗视野（0.04μm未染活标本、线粒体鞭毛运动）
荧光（暗室或远离窗口避免可见光干扰）二甲苯擦拭镜头。
17.高压蒸汽灭菌：压力到0温度降到50~60度。 18.电热恒温干燥箱：一般选择50-250度。
灭菌：开排气口排气后关排气口加热至160保持2h关电源，开排气口降至80度再开门。 干燥：80度
19.滤菌器：0.22μm材质：玻璃和金属，原理：负压和正压 20.冰箱：关掉10min后才可再次启动
21.超低温冰箱：-100度，可保存冻干菌种。空气过滤网至少1月一次。5min再次启动。
操作带干手套，以免冻伤，误将盛水的容器放入，早晚观测。 22.空气微生物采样器：
固体撞击、离心、气旋、液体冲击、过滤、大容量静电沉降。
23.电热恒温水浴箱：20-60度，先加（蒸馏）水在通电，
24.超声波清洗仪：原理，空化作用，不与不锈钢发生反应的液体均可做清洗剂。深度不低于5厘米，避免温度过高。
25.振荡器：开机前加蒸馏水，液体不超过容器的1/3；开机时速度应缓慢由低至高调节。长期不用，应将水放掉。
26.可直接加热的仪器：烧杯、三角瓶、试管、蒸发皿。
27.试剂瓶：磨口瓶：非强碱性和有机试剂；非磨口瓶，碱性或浓盐酸。 28.滴定管：0.2-0.1ml，微量滴定管精度为0.005ml。
蛋白质、核酸提取相关设备
29.提取蛋白及核酸：蛋白质，分离和纯化，（硫酸铵）盐析法； 核酸，分离和纯化，酚、氯仿抽提。
细菌外膜蛋白，超声波粉碎机，限制内切酶37度使用，-20度保存。 30.层析：1）凝胶过滤法（分子筛层析法）常用介质（葡聚糖）主要用于（蛋白
或核酸分离）
该法先洗脱大分子，再脱小分子。原理（凝胶形成多孔网状结构）。 2）离子交换层析，常用介质（纤维素）主要用于（分离纯化蛋白） 原理：纤维素或凝胶介质所带电荷不同。
31.检测设备：1）分光光度计，菌600；蛋白280；核酸260颜色反映450 石英比色皿用于紫外分光光度剂 玻璃 可见光
2）紫外透射仪，使用条件（暗室、紫外线） 紫外线下，看DNA条带
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3）色谱 气象色谱 微生物分类和鉴定，化学成分分析 液相色谱 微生物化学成分分析 质谱仪 微生物化学成分分析 4）测序仪 蛋白测序仪测定氨基酸排列顺序 DNA测序仪测核苷酸排列顺序
（可选用质粒、噬菌体、PCR产物）
5）扩增仪 可做PCR的仪器。 6）酶标仪 做ELISA的仪器。
ELISA反应设备包括（塑料凹孔板、洗板机、酶标仪）
32.电泳：类别，醋酸纤维膜电泳——免疫球蛋白鉴定 琼脂免疫电泳——蛋白分离和鉴定 对流免疫电泳——抗原，抗体 火箭电泳——测抗原量
交叉定量免疫电泳——测抗原量 IFE—等电聚焦电泳——蛋白质分离 PFGE—脉冲电泳——核酸分离
PAGE—聚丙酰胺凝胶电泳——蛋白和核酸分离
1）聚丙酰胺凝胶电泳，原理，凝胶介质形成立体多孔网状结构，
分子筛+电泳=上大分子，下小分子
过硫酸铵在PAGE制备中起催化聚合作用。 SDS-PAGE，十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳——蛋白质分离 上大下小，丙烯酰胺浓度越大，线性分离范围越小， 十二烷基硫酸钠作用：解离蛋白， 染色剂：考马斯亮蓝、硝酸银；
缓冲液重要成分：甘氨酸 2）等电点聚焦电泳IFE 原理：两性电解质制造凝胶有不同PH，使不同电荷多肽在电泳条件下在等电点停留。用聚丙烯酰胺制备。
3） 脉冲电泳PFGE 正交交变脉冲电场，琼脂糖制备 靠近负极为大片段DNA 染色溴化乙锭（致癌）硝酸银 丙烯酰胺（神经毒素） 4）琼脂糖凝胶电泳——核酸分离纯化 水平电泳槽，200bp-50kb，入DNA是为测算DNA电泳带分子量。 5）聚丙烯酰胺电泳——核酸分离 垂直电泳槽，分离5-500bP的核酸
第十二章 实验室生物安全
1.实验室废弃物，须经过物理 高压灭菌 或 化学消毒 后才可离开实验室。 2.每年 进行一次压力容器安全和质量检测。
3.更换实验室及生物安全柜的高效过滤器前，须进行 甲醛熏蒸。 4.病原微生物实行双人双锁、使用审批制度。
5.相关实验室人员每年定期培训，对实验室污染状况使用频度进行定期监测。
卫生资格考试 预防医学技术 微生物检验 011 019 024等专业
