种不同温度进行DNA变性、引物复性、DNA聚合酶催化的延伸反应的三个过程
PCR仪主要应用于基础研究和应用研究等许多领域，如基因分析、序列分析、进化分析、临床诊断、法医学等等 七．电泳仪
电泳技术是分子生物学研究不可缺少的重要分析手段。电泳一般分为自由界面电泳和区带电泳两大类，自由界面电泳不需支持物，如等电聚焦电泳、等速电泳、密度梯度电泳及显微电泳等，这类电泳目前已很少使用。而区带电泳则需用各种类型的物质作为支持物，常用的支持物有滤纸、醋酸纤维薄膜、非凝胶性支持物、凝胶性支持物及硅胶-G薄层等，分子生物学领域中最常用的是琼脂糖凝胶电泳 注意事项
1． 电泳仪通电进入工作状态后，禁止人体接触电极、电泳物及其它可能带电部分，也不能到电泳槽内取放东西，如需要应先断电，以免触电。同时要求仪器必须有良好接地端，以防漏电。
2． 仪器通电后，不要临时增加或拨除输出导线插头，以防短路现象发生，虽然仪器内部附设有保险丝，但短路现象仍有可能导致仪器损坏。
3． 由于不同介质支持物的电阻值不同，电泳时所通过的电流量也不同，其泳动速度及泳至终点所需时间也不同，故不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行。
4.使用过程中发现异常现象，如较大噪音、放电或异常气味，须立即切断电源，进行检修，以免发生意外事故。
实验二 琼脂糖凝胶电泳的制备及核酸检测
带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳。电泳的种类多，应用非常广泛，它已成为分子生物学技术中分离生物大分子的重要手段。琼脂糖凝胶电泳由于其操作简单、快速、灵敏等优点，已成为分离和鉴定核酸的常用方法。 实验目的
掌握琼脂糖凝胶电泳的原理; 学习琼脂糖凝胶电泳的操作。 实验原理
琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，沸水中溶解，45℃开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。
DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同DNA，其分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，主要是利用分子筛效应，迁移速度与分子量的对数值成反比关系。
溴化乙锭（EB）为扁平状分子，在紫外照射下发射荧光。EB可与DNA分子形成EB-DNA复合物，其发射的荧光强度较游离状态EB发射的荧光强度大10倍以上，且荧光强度与DNA的含量成正比。用肉眼观察，可检测到5 ng以上的DNA。 1．影响DNA在琼脂糖凝胶中迁移速率的因素： 1)DNA分子大小???????
迁移速率U与logN成反比（N为碱基对数目）。分子大小相等，电荷基本相等（DNA结构重复性）。分子越大，迁移越慢。等量的空间结构紧密的电泳快（超螺旋>线性DNA） 2)?琼脂糖浓度：不同的凝胶浓度，分辨不同范围的DNA
???Agarose：??%：??1-30?kb；??????? ??????????%：? ?kb
%：???kb；???????????? ???? %：? ?kb.
3)DNA构象：一般迁移速率超螺旋环状>线状DNA>单链开环。
4)所加电压：低电压时，线状DNA片段的迁移速率与所加电压成正比。使分辨效果好，凝胶上所加电压不应超过5V/cm
5)碱基组成与温度：一般影响不大4?-30?℃
6)嵌入染料的存在：降低线性DNA迁移率，(不提倡加在电泳液中)
7)电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的迁移率，无离子存在时，核酸基本不泳动，离子强度过大产热厉害，熔化凝胶并导致DNA变性，一般采用1×TAE，1×TBE，1×TPE（均含EDTA??）。
2．溴化乙锭（EB）为致癌剂，操作时应戴手套，尽量减少台面污染。
3．电泳指示剂：核酸电泳常用的指示剂有两种，溴酚蓝（bromophenol?blue,?Bb）呈蓝紫色；二甲苯晴（xylene?cyanol,?Xc）呈蓝色，它携带的电荷量比溴酚蓝少，在凝胶中的迁移率比溴酚蓝慢。 仪器和试剂 仪器
微量移液器，电泳仪，电泳槽，微波炉 试剂
琼脂糖：%；
电泳缓冲液（50 × TAE 电泳缓冲液取Tris24.2g ，冰醋酸 ， L EDTA 20ml ，加蒸馏水至100ml ）
EB：5 μl / 100 ml TBE
电泳材料：标准分子量核酸（DL2000） 操作步骤
（1）制胶（以20 mL为例）
a. 称取0.2 g 琼脂糖，加入20 ml 的1XTAE缓冲液（pH ），摇匀； b. 微波炉加热，至琼脂糖完全溶解（要防止过热溢出三角瓶）；
c.将制胶板放入制胶槽中，插入适当的梳子，将溶解的琼脂糖（约50℃）加入2ul EB后，混均匀，倒入其中，直至厚度为4～6 mm（如有气泡要把气泡赶出），在室温下冷却凝固(约30~ 45 min)；
d.小心垂直向上拔出梳子,以保证点样孔完好,将胶板置于电泳槽中。 （2）点样
用微量移液器将5 μl含蓝色染液的 DL2000 加入点样孔下部。 （3）电泳
打开电源开关，调节电压至3~5 V/cm(约100 V)，可见到溴酚蓝条带由负极向正极移动，约30-40分钟后即可观察结果。 （4）观察
将电泳好的胶置于紫外透射检测仪上，打开紫外灯，可见到橙红色核酸条带，根据条带粗细，可粗略估计该样品DNA的浓度。如同时有已知分子量的标准DNA进行电泳，则可通过线性DNA条带的相对位置初步估计样品的分子量。 实验结果及分析
实验结果不是很理想，可能的原因是小组间的点样间隔时间太长以至于样品扩散造成结果的不理想另一个人原因是点样没有到位造成的，第二种原因的可能性大一点。 作业
做琼脂糖凝胶电泳应注意哪些问题。
答：1，溴化乙锭（EB）为致癌剂，操作时应戴手套，尽量减少台面污染 制琼脂糖凝胶时在特定的操作区操作。
2，微波炉加热使琼脂完全溶解要防止过热溢出三角瓶，要在瓶上加一张纸。
3，制胶时插入适当的梳子，当琼脂糖冷却凝固后，要小心垂直向上拔出梳子，小心样孔被弄破
4，点样时，要把样品点入点样孔下部，电泳时条带平整明亮。 5，要正确使用微量移液器，等器材视点用后的结果不致出现错误。
分子生物学实验室常用仪器设备简介 精
