针对乳酸的细菌内毒素限值（L）：﹤5EU/g的检查
细菌内毒素检查法系用鲎试剂与内毒素产生凝集反应的机理，以判断从供试品中的细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法，内毒素的量用内毒素单位（EU）表示。 1.试验材料与用具：
1.1天平：供试品称量用，精度为0.4g以下；
1.2电热鼔风干燥箱： 用于去除外源性内毒素，温度应能达到250℃； 1.3旋涡混合器；
1.4细菌内毒素凝胶检测仪；
1.5鲎试剂（TAL）：灵敏度λ=0.25 EU /ml ，湛江安度斯生物有限公司 1.6细菌内毒素国家标准品（NSE）或工作标准品（CSE）：10EU/支，湛江安度斯生物有限公司，除另有规定外，应使用由中国药品生物制品检定所统一发放的标准品；
1.7细菌内毒素检查用水（BET水）：湛江安度斯生物有限公司，指内毒素含量小于0.015Eu/ml，（用于凝胶法）或0.005EU/ml（用于光度测定法）且对内毒素试验无干扰作用的灭菌注射用水；
1.8实验用具： 移液管（或刻度乙管微量移液器及无热原吸头）、凝集管（10mm*75mm）试管架、洗耳球、封口膜、75％酒精棉球、剪刀、砂轮。所用玻璃器具须经250℃干烤30分钟以上。若使用塑料器械，应选用标明物内毒素并且对试验无干扰的器械。
2.实验制备：
2.1玻璃器皿的洗涤：将玻璃器皿放入铬酸洗液或其他热源灭活剂中充分浸泡，用自来水冲洗残留，再用蒸馏水反复冲洗三遍以上，空干后放入密闭的金属容器或用锡箔纸包好再放入金属容器内，置入电热干燥箱。
2.2玻璃器皿表面可能存在的外热源内毒素的去除 250℃干烤30分钟以上，在不 打开金属容器的情况下，可在两天内使用，用锡箔纸包装则在不打开包装情况下可在两周内使用，否则须再次干烤除去可能存在的外源性内毒素。 2.3 溶液的制备
2.3.1供试品溶液的制备：
首先计算MVD=C×L/λ （ C为供试品制备成溶液后的浓度，单位为mg/ml或u/ml、L为供试品的细菌内毒素限值，λ为所用鲎试剂的标示灵敏度）。然后将供试品进行稀释，其稀释倍数不得超过MVD.
精密称取乳酸0.4g，加细菌内毒素检查用水（BET水）适量，用碱溶液调节pH
至中性,制成4C的供试品溶液.再稀释制成2C的供试品溶液. 2.3.2阳性对照液的制备：
按照标准品说明书，加入规定量的细菌内毒素检查用水1.0ml溶解其内容物，用封口膜将瓶口封严，置漩涡混合器上混合15min。然后进行稀释，每稀释一步均应在漩涡混合器上混合30秒钟，将标准品稀释制成2λ浓度的内毒素标准溶液。
2.3.3供试阳性对照液的制备
取0.4ml浓度为1.0EU /ml的内毒素标准品溶液+0.4ml供试品溶液，制备成含2λ的供试品阳性对照。
2.3.4阴性对照液： 即细菌内毒素检查用水 2.4鲎试剂的制备：
2.4.1取规格为0.1ml支的鲎试剂（TAL）8支，轻弹瓶壁使粉末落入瓶底，用砂轮在瓶颈轻轻划痕，75%酒精棉擦拭后启用，防止玻璃屑落入瓶内。每支加入0.1ml检查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解，避免产生气泡。 2.4.2加样：取8支溶解好的鲎试剂，
其中2支加入0.1ml供试品溶液，（其稀释倍数不得超过MVD）为供试品管；
2支加入0.1ml阳性对照溶液作为阳性对照管（PC）； 2支加入0.1ml检查用水为阴性对照（NC）；
2支加入0.1ml供试品阳性对照溶液为供试品阳性对照管（PPC）
2.4.3将试管中溶液轻轻混匀后，用封口膜封闭管口，放入细菌内毒素凝胶检测仪中，设置温度37℃，保温时间60分钟，在取放保温安瓿瓶过程中应避免受到振动造成假阴性结果。 2.5结果判断：
将安瓿瓶轻轻取出后，缓缓倒转180度时，若管内凝胶不从管壁滑落者应为阳性（＋）；未形成凝胶或凝胶不能保持完整并从管壁滑落者为阴性（—）。 且阴性对照管为阴性，阳性对照管、供试品阳性对照都为阳性时，试验方为有效，若供试品2管均为阴性，认为该供试品符合规定； 如供试品2管均为阳性，应认为不符合规定；
如2管中一管为阳性，一管为阴性，按上述方法另取4支供试品管复试，4管中如有一管为阳性，即认为不符合规定。
乳酸内毒素限度检查方法
