自然杀伤性T淋巴细胞数量分布变化与肝癌转移的相关性
研究
刘长芳,吴翠娇,李慧＊,张静＊
【摘 要】摘要：目的探讨自然杀伤性T细胞的数量分布变化与肝癌转移的相关性。方法采用鼠抗人CD3、CD56单克隆抗体双重免疫法，正常肝脏组织及不同分期肝癌组织中自然杀伤T淋巴细胞的数量及分布情况，运用统计学分析自然杀伤性T淋巴细胞的数量分布变化与肝癌细胞迁移的相关性。应用SPSS20.0软件，所获数据采用方差分析和t检验。结果各分期肝癌组织中自然杀伤性T淋巴细胞的数量与正常肝组织内自然杀伤性T细胞的数量比较，P＜0.0005,肝癌Ⅰa期-Ⅱa期与Ⅱb期-Ⅲb期的自然杀伤性T细胞数量比较，P＜0.005。结论肝癌组织中自然杀伤性T细胞的数量依赖于组织被癌细胞侵袭的程度不同而分布不同，肝脏的微环境影响自然杀伤性T细胞的分化，自然杀伤性T细胞数量与肝癌转移具有相关性。 【期刊名称】菏泽医学专科学校学报 【年(卷),期】2017(029)001 【总页数】4
【关键词】肝癌;自然杀伤性T细胞;免疫组化
肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，据世界卫生组织统计2012年全球约有78.2万例肝癌新发病例，其中83%发生在发展中国家，中国占50%[1]，发病率为28.17/105，占所有恶性肿瘤的第4位(10.04%)，而死亡率为26.04/105，占所有癌症死亡的第2位[2]。肝癌起病隐匿，缺乏有效的早期诊断方法,确诊后缺乏有效的治疗方法，肝癌患者的高复发率和低生存率，仍是临床研究的重点
内容。肝癌的转移和复发机制非常复杂，细胞免疫在抗肿瘤过程中具有特殊重要的地位，在细胞免疫中已知的效应细胞有T淋巴细胞、树突状细胞（DC）、自然杀伤细胞（NK）及巨噬细胞。自然杀伤性T淋巴细胞（NKT细胞）因同时具有NK细胞和T细胞部分表型及功能的细胞亚群，越来越受到重视。NKT细胞在先天性免疫和获得性免疫之间起到桥梁的作用[3]，这些细胞可以同时识别主要组织相容性复合体CD1分子[4-6]，活化后迅速分泌大量细胞因子，直接或间接参与机体的免疫应答[7]，从而使机体处于某些疾病的康复或发展状态。另外，很多研究认为NKT细胞的数量和功能变化与动物和人类的疾病发生发展密切相关[5-7]。肝脏是含自然杀伤性T淋巴细胞最多的器官，约占肝脏T淋巴总数的20%～30%，并在肝脏疾病的发病机制中起着重要的作用，NKT细胞可以通过产生促炎性细胞因子和直接杀伤作用促进肝脏的损伤，另外NKT细胞可以通过抑制肝星状细胞的激活来抑制肝纤维化，还可以通过增强肝脏的炎症和损伤促进肝纤维化，通过激活NKT细胞可以抑制肝脏再生，在肝癌中NKT细胞在控制肿瘤的进展中既能发挥抗肿瘤作用也能产生促瘤效应[8]。NKT细胞的这种双向免疫调节作用越来越引起学术界的兴趣，为此、我们对不同分期的肝癌中NKT细胞数量及分布变化。现报道如下。
1 材料与方法
1.1 标本及来源收集我院肝胆外科、普外科正常肝组织15例，根据全国肝癌协会会议拟定的分期标准，Ⅰ期18例，其中Ⅰa期10例，Ⅰb期8例;Ⅱ期21例，其中Ⅱa期10例，Ⅱb期11例；Ⅲ期25例，其中Ⅲa 13例，Ⅲb期12例。 1.2 材料
1.2.1 试验材料小鼠抗人CD3单抗(即用型CST公司生产)；小鼠抗人CD56单抗体(即用型CST公司生产)；羊抗小鼠辣根过氧化物酶(HRP)标记二抗(即用型CST公司生产);3%过氧化氢溶液;pH7.2-7.4的PBS磷酸盐缓冲液；pH9.0的EDTA（乙二胺四乙酸钠）抗原修复液；AEC显色系统(solarbio公司)，使用时按说明书配制；水溶性封片剂；免疫组织化学专用湿盒;免疫组织化学专用抗原修复架及修复盒。
1.2.2 方法所有标本经10%福尔马林固定石蜡包埋，连续4μm切片，脱蜡、水化，EDTA缓冲液抗原修复、PBS缓冲液漂洗，切片滴加辣根过氧化物酶(HRP)标记二抗，避光孵育10～15分钟，采用小鼠抗人CD3单克隆抗体、小鼠抗人CD56单克隆抗体联合双重免疫组织化学标记，以AEC显色系统显色，显色充分后入双蒸水阻断显色反应，用苏木精复染2～3分钟后封片。然后分别计数在正常肝脏组织、不同分期肝癌组织中NKT细胞的数量及分布情况，运用统计学方法分析各组数据。
1.3 统计学处理应用SPSS20.0软件所获数据采用方差分析和t检验。
2 结果
2.1 各组形态学结果实验中能同时表达CD3、CD56抗原分子的淋巴细胞为阳性NKT细胞，典型NKT细胞形态特征为棕褐色的细胞膜周围附着鲜红色的颗粒状沉积，正常组肝组织，Ⅰa-Ⅱa期、Ⅱb-Ⅲb期NKT细胞染色结果见图1、图2、图3。肝癌随病程进展肝脏内环境变化NKT细胞数量逐渐下降，箭头指示为NKT细胞。e、f晚期肝癌NKT细胞数量进一步下降，视野内NKT数量很少。
2.2 不同分期肝癌中NKT细胞数量之间的关系见表1。
自然杀伤性T淋巴细胞数量分布变化与肝癌转移的相关性研究
