KW-2478对肿瘤细胞增殖作用的影响*
常晓敏1， 王建平1， 赵学荣1， 肖丽君1*【通讯作者】肖丽君， 赵恩宏2， 任 聪2， 白文武2
【摘 要】【摘 要】 目的研究KW-2478对Eca109和KYSE-150食管癌细胞株、SGC-7901胃癌细胞株、HepG2肝癌细胞株、MCF-7乳腺癌细胞株5种肿瘤细胞体外增殖作用的影响，同时观察KW-2478对HL-7702正常肝细胞的作用。方法体外培养HL-7702，Eca109，KYSE-150，SGC-7901，MCF-7和HepG2细胞，给予不同浓度的KW-2478，24h和48h后采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞增殖情况。结果不同浓度KW-2478作用于肿瘤细胞24h和48h后，5种肿瘤细胞的增殖能力均降低，呈现剂量和时间依赖性，且在Eca109细胞和HepG2细胞呈现剂量与时间交互作用，但HL-7702细胞的增殖情况未受明显影响。结论KW-2478对Eca109，KYSE-150，SGC-7901，MCF-7和HepG2细胞有抑制作用，对HL-7702正常肝细胞的增殖无明显影响。 【期刊名称】河北医学 【年(卷),期】2018(024)001 【总页数】6
【关键词】【关键词】 KW-2478； MTT； 增 殖； 肿瘤细胞
近些年肿瘤的发病率呈现逐年上升的趋势，传统的手术、放化疗等治疗方法在治疗肿瘤的同时，也因创伤大，毒副作用严重给病人带来了巨大的痛苦。分子靶向治疗以杀伤肿瘤细胞，对正常细胞毒副作用小等优点成为研究的热点。分子伴侣Hsp90被认为是肿瘤分子靶向治疗的新靶点[1]。Hsp90作为分子伴侣
与其他的辅分子伴侣如Hsp70、Hsp40、Hop、p23、cdc37形成复合体，并与细胞内的许多“客户蛋白”结合在一起，促进这些蛋白进行适当的折叠、装配，从而达到其活性构象并增强其稳定性[2]。并且Hsp90的客户蛋白是在肿瘤生长转移的信号通路中起重要作用的蛋白激酶和转录因子[3]。因此科学界广泛关注针对Hsp90靶点抑制剂的研究。KW-2478是一种新型的非安莎类，非嘌呤类的Hsp90抑制剂[4]。它在生理盐水中溶解度高，并且动物实验中没有发现肝毒性，在国外它已经进入多发性骨髓瘤的临床试验阶段，但到目前为止未见相关文献报道它对实体瘤的作用，我们课题组筛选了5种肿瘤细胞株，同时选取了一种正常肝细胞株，通过MTT检测KW-2478对6种细胞增殖能力的影响，为该药的进一步研究提供数据资料。
1 材料和方法
1.1 细胞、主要试剂和仪器:细胞：Eca109和KYSE-150食管癌细胞株，HepG2肝癌细胞株，均购自上海博谷生物科技有限公司，HL-7702细胞株购自南京科佰生物科技有限公司，SGC-7901胃癌细胞株、MCF-7乳腺癌细胞株为本实验室自留。主要试剂：KW-2478(chemicals)；噻唑蓝(sigma)；RPMI-1640培养基和DMEM培养基(gibco)；胎牛血清(康源生物)；PBS(hyclone)；胰酶(tbd)；青链霉素(tbd)；DMSO(sigma)。仪器：酶标仪(BioTek)；细胞培养箱(Thermo)；倒置生物显微镜(Motic)。
1.2 主要方法:细胞培养：Eca109，KYSE-150和HL-7702细胞株用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基培养，MCF-7，HepG2和SGC-7901细胞株用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养，置于37℃，5%CO2培养箱中，每2d换液1次，3d传代1次，选用对数生长期细胞进行MTT实验。MTT法测
定KW-2478对多种细胞增殖情况的影响：采用体外培养至对数生长期的细胞，用0.25%的胰酶消化，轻轻吹打，细胞收集于15mL离心管中，1000r/min 5min离心，弃去上清，加入2mL相应的含血清培养基制成单细胞悬液，计数，调整细胞密度为1.5×104个/mL，200μL/孔加入到96孔板，37℃，5%CO2培养箱中继续培养，24h后取出96孔板，观察细胞状态良好，弃去96孔板的上清，加入新鲜培养基190μL/孔，另外加入10μL/孔KW-2478以配制成实验设计相应的药物终浓度，每个浓度设5个复孔，同时设立对照组(不加药组)和空白对照组(只加含血清培养基)作为对照。放入37℃，5%CO2培养箱中培养24h和48h后，每孔加入5mg/mL新鲜配制的MTT 10μL/孔，继续培养4h后，小心弃去上清，每孔加入150μL DMSO(二甲基亚砜)，用酶标仪490nm波长慢速震荡10min，检测各孔的OD值。计算药物对肿瘤细胞的生长抑制率=(对照组OD值-药物组OD值)/(对照组OD值-空白对照组OD值)×100%,通过直线回归计算IC50。实验重复3次。
1.3 统计学处理:采用SPSS 20.0软件进行统计学分析。计量资料用均数±标准差表示，采用析因设计方差分析对数据进行处理。以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 KW-2478对HepG2细胞株增殖能力的影响：KW-2478对体外培养的HepG2细胞株作用浓度为1.5～10.5mg/L时有显著的抑制作用(表1，图1)，且呈剂量-时间依赖关系，两者具有显著交互作用(P<0.01)，具有统计学意义(表2)。
2.2 KW-2478对Eca109细胞株增殖能力的影响：KW-2478作用浓度为1～
KW-2478对肿瘤细胞增殖作用的影响
