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2型糖尿病患者血清miR-126表达的临床意义
作者：卢佩颖 谷卫 陈岳明
来源：《心脑血管病防治》2012年第01期
【摘要】 目的：探讨2型糖尿病患者外周血血清中miR-126的表达水平及其临床意义。方法：采用荧光定量PCR方法检测77例糖代谢异常患者血清miR-126的表达（其中糖调节受损组26例, 初发2型糖尿病组23例，2型糖尿病伴有血管病变患者28例，和30例健康对照组）。结果：miR-126在健康对照组与糖调节受损组血清中的表达无明显差异（P>0.05）；初发糖尿病组与健康对照组及糖调节受损组之间均有差异（P0.05）。结论：2型糖尿病及合并有血管病变患者外周血血清中miR-126水平低表达。 【关键词】糖尿病；2型；miR-126；血清
2型糖尿病的发病机制复杂至今尚未完全清楚，主要与胰岛素作用的缺陷有关。近年研究发现微小核糖核酸（microRNA，miRNA）与胰岛素的生成、胰岛素分泌、胰岛素作用及胰岛的发育密切相关，并发现了很多胰岛特异性的miRNAs【1，2】，而且miRNA存在于人类外周血中，在血清和血浆中均持续表达而且水平稳定【3】，具有可重复性；这一特性使得miRNAs有望成为多种疾病中新的非创伤性生物学标记物。本文采用逆转录荧光定量PCR方法检测了2型糖尿病患者外周血血清中miR-126的表达水平，探讨了其在糖尿病发病中的意义。 1 资料与方法
1．1 一般资料：选取2010年6月至2010年12月就诊于杭州市第一人民医院的77例糖代谢异常患者及30例健康对照者，其中糖尿病伴有血管病变患者28例（包括脑梗死3例，视网膜病变12例，肾病13例），男15例，女13例，年龄53～75岁（平均58.43±5.72岁）；初发糖尿病组23例，男11例，女12例，年龄48～68岁（平均55.74±6.51岁）；糖调节受损组26例（包括空腹血糖受损，OGTT结果FPG6.1~7.0mmol/L，且2 h PG
1．2血糖测定采用葡萄糖磷酸脱氢酶法在全自动生化分析仪上进行检测，口服葡萄糖耐量试验(OGTT)指受试者于空腹及口服75g 无水葡萄糖后2 小时分别抽取静脉血，测空腹血糖和2 小时血糖。
1．3血清总RNA提取 分离1ml血清储存于-80℃冰箱，待标本收集完成后统一采用RNeasy Mini Kit总RNA提取试剂盒（QIAGEN，74104）提取血清中游离总RNA。
1．4miR-126表达的检测miR-126定量检测采用茎环逆转录荧光定量PCR方法，以U6为内参，引物与探针购置Appliedbiosystems公司。逆转录反应体系如下：10×逆转录缓冲液
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1.5ul，100mM dNTP 0.15ul，逆转录酶1.0ul，RNase抑制剂0.19ul，逆转录引物3.0ul，总RNA5.0ul，水补足15ul后，置30℃孵育30分钟，42℃孵育45分钟，85℃孵育5分钟。荧光PCR体系如下：2×PCR缓冲液10ul，20×miR-126特异引物和荧光探针1ul，逆转录产物1ul，水补足至20ul，置ABI7500荧光PCR仪上按照95℃ 5分钟，95℃ 15秒，60℃ 45秒反应40个循环，采集数据分析结果。
1．5统计学分析：使用SPSS16.0统计软件进行统计分析。计量资料均以(x±s方式表示，组间计量资料比较用方差分析，以p 2结果
2．1 资料分析结果：四组研究对象的性别分布，年龄方面无统计学差异（p>0.05）；而空腹血糖和餐后2小时血糖在健康对照组、糖调节受损组、初发糖尿病组和糖尿病伴有血管病变组呈现梯度增高趋势，各组之间有统计学差异（P
2．2血清总RNA提取1ml血清提取的总RNA浓度在四组间无统计学差异（P>0.05）； 对照组总RNA浓度为（35.43±3.21）ng/ul，糖调节受损组总RNA浓度为（34.57±3.09）ng/ul，初发糖尿病组总RNA浓度为（35.87±4.26）ng/ul，糖尿病伴有血管病变组总RNA浓度为（34.76±3.28）ng/ul。
2．3四组血清miR-126表达分析:对照组血清miR-126相对表达水平为（0.154±0.012）ng/ul，糖调节受损组为（0.158±0.014）ng/ul，初发糖尿病组为（0.092±0.024）ng/ul，糖尿病伴有血管病变组为（0.082±0.025）ng/ul；四组间血清miR-126表达水平比较，miR-126在对照组与糖调节受损组血清中的表达无明显差异（P>0.05）；初发糖尿病组与对照组及糖调节受损组之间均有差异（P0.05）见图1。 3讨论
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微小核糖核酸(microRNA，miRNA)是一类仅有19-25核苷酸的小RNA分子，既能与其靶基因mRNA的3’非编码区，又能与编码区不完全互补结合而降解mRNA或转录后抑制蛋白翻译，是一种新的调节基因表达的方式。miRNA不仅在哺乳动物细胞的生长、增殖、凋亡和分化具有时向和组织特异性【4，5】，而且在干细胞的生成过程中同样也发挥重要作用【6】；糖尿病的发生发展与细胞间的信号转导及相互作用密切相关，因此也需要miRNA介导的调节，在糖尿病不同阶段miRNA将具有特征性的表达方式。有报告miRNA与胰岛素的生成、胰岛素分泌、胰岛素作用及胰岛的发育密切相关【7】。最近研究糖尿病的血清miRNA差异表达谱表明2型糖尿病患者血清中miR-126表达缺失，因此本文检测了健康对照、糖调节受损组、初发糖尿病和糖尿病伴有血管病变患者血清中miR-126的表达情况，尽管对照组与糖调节受损组之间以及初发糖尿病组与糖尿病伴有血管病变组之间血清中miR-126表达水平无明显差异，但发现初发糖尿病组和糖尿病伴有血管病变组血清中miR-126表达水平明显低于对照组与糖调节受损组，说明miR-126在糖尿病发病中可能具有一定作用。也有研究表明miR-126在肝细胞中能够通过靶向抑制IRS诱导胰岛素抵抗，因此从另外一个侧面反应了miR-126与糖尿病有关【8，9】。综上所述，miRNA检测可反应糖尿病病情的发展情况，随着样本量加大及多中心研究找到糖尿病特异的miRNA及潜在的生物靶标，miR-126也有可能成为2型糖尿病的诊断标志和治疗靶标。并且随着糖尿病microRNA组学研究的深入，miRNAs的功能及其作用靶点的明确将为糖尿病的诊断和治疗带来全新的思路和方法。 参考文献
[1] Ferland-McCollough D, Ozanne SE, Siddle K, et al. The involvement of microRNAs in Type 2 diabetes. Biochem Soc Trans. 2010,38 (6):1565-70.
[2]王允山， 张雅，梁浩 ，等. miRNAs在糖尿病及其并发症中的作用. 生理学进展, 2010,41 (2)：133-6.
[3] 赵康辰，崔仑标，史智扬.血清/血浆miRNA及其应用. 医学分子生物学杂志，2010，7（2）：180-183.
[4] Bartel DP. MicroRNAs. genomics, biogenesis, mechanism, and function. Cell,2004,116: 281-97
[5] Ambros V. The functions of animal microRNAs. Nature,2004,431: 350-5. [6]Cheng LC, Tavazoie M, Doetsch F. Stem cells: from epigenetics to microRNAs. Neuron,2005,46: 363-7.
[7] Tang X, Tang G, Ozcan S. Role of microRNAs in diabetes. Biochim Biophys Acta, 2008, 1779(11):697-701.
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