将凝胶置于电泳槽，加入1×TAE电泳缓冲液覆盖胶面即可。各取PCR产物和DNA分子量参照物10 μl DNA加入1μl 6×loading buffer，混合后上样，分不加入琼脂糖凝胶孔内。加样时切勿破坏点样孔周围的凝胶。
3. 电泳：
合上电泳槽盖，打开电泳仪，操纵电压保持在60-80V，电流在40mA 以上。当溴酚蓝条带移动到距凝胶前沿约2cm 时，停止电泳。
4. 染色：
未加EB 的胶板在电泳完毕后移入0.5μg/ml 的EB 溶液中，室温下染色20-25 分钟。
5. 观看和拍照：
电泳完成后切断电源，取出凝胶，置于凝胶成像分析仪上观看电泳结果，并照相记录。或在波长为254 nm的紫外灯下观看DNA的荧光条带。紫光灯下观看时应戴上防护眼镜或有机玻璃面罩，以免损害眼睛。
【注意事项】
1．阻碍DNA在琼脂糖凝胶中迁移速率的因素：
（1）DNA大小：迁移速率与log N成反比（N为碱基对数目）。分子越大，迁移越慢。分子量相同的空间结构越紧密的电泳越快，如超螺旋>线性DNA。
（2）琼脂糖凝胶浓度：不同的凝胶浓度，辨论不同范畴的DNA ：
琼脂糖凝胶浓度 0.5% 0.7% 可辨论的线性DNA片段大小（kb） 5－60 0.8－12 1.0% 1.5% 1.75% 2.0％ 0.4－6 0.2－4 0.2－3 0.1－3 （3）DNA构象：一样迁移速率超螺旋环状 > 线状DNA > 单链开环。当条件变化时，情形会相反，还与琼脂糖的浓度、电流强度、离子强度及EB含量有关。
（4）所加电压：低电压时，线状DNA片段的迁移速率与所加电压成正比。使辨论成效好，凝胶上所加电压不应超过20V/cm，电泳温度应该低于30℃。
（5）嵌入染料的存在：降低线性DNA迁移率（不提倡加在电泳液中）。
（6）电泳缓冲液（0.5×TBE）的组成及其离子强度阻碍DNA的迁移率。无离子存在时，核酸差不多不泳动；离子强度过大产热厉害，熔化凝胶并导致DNA变性。一样采纳1×TAE，1×TBE，1×TPE（均含EDTA pH8.0）。
2．溴化乙锭（EB）为致癌剂，操作时应戴手套，尽量减少台面污染，凡是沾污了EB 的容器或物品必须经专门处理后才能清洗或丢弃。
3．电泳指示剂：核酸电泳常用的指示剂有两种，溴酚蓝（bromophenol blue, Bb）呈蓝紫色；二甲苯晴（xylene cyanol, Xc）呈蓝色，它携带的电荷量比溴酚蓝少，在凝胶中的的迁移率比溴酚蓝慢。
【实验结果与分析】
1．电泳过程中，你自己或本组所采纳的电压为________伏特（v），电流为_______毫安（mA），通电时刻为_______分钟。
2．在实验报告上描画自己或实验组的电泳图谱，标明阳极和阴极位置。
【摸索题】
你的电泳结果如何？成功或失败有哪些方面的缘故？进行琼脂糖凝胶电泳时应注意哪些咨询题？
《分子生物学检验技术》实验指导
