p38 MAPK阻滞剂对百草枯中毒急性肺损伤中TNF-α的
影响
周志兵 张剑锋（通讯作者） 向沥 李霁 罗毅丰
【摘 要】【摘要】目的：探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）在百草枯中毒急性肺损伤中对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响。方法：36只SD大鼠按随机数字法分为生理盐水组（NS组）、PQ中毒组（PQ组）、阻滞剂干预组（PQ+SB组），每组各12只，每组再从中各取第1天和第3天6只样本检测，通过观察肺组织病理学变化、肺泡灌洗液中炎症介质TNF-α变化，qRT-PCR法检测各组大鼠肺组织中TNF-α和p38 MAPK mRNA表达变化，以此来寻找环境压力应激反应蛋白p38 MAPK与肺组织炎症反应的相关性。结果：同一时间点的PQ组肺泡灌洗液中的TNF-α蛋白表达量显著高于NS组（P＜0.05），而同一时间点PQ+SB组较PQ组肺泡灌洗液中的TNF-α蛋白表达量在第3天下降（P＜0.05）。同一时间点的PQ组TNF-α和p38 MAPK的mRNA表达量显著高于NS组（P＜0.05），同一时间点PQ+SB组较PQ组表达量下降（P＜0.05）。而PQ组内不同时间点的肺组织中的TNF-α和p38 MAPK mRNA随时间增高（P＜0.05）;但PQ+SB组的TNF-αmRNA则无显著差异（P＞0.05）；肺组织病理学变化也显示同一时间点PQ组较NS组病理损伤明显，而PQ+SB组较PQ组病理损伤减少。结论：p38 MAPK抑制剂SB203580能够降低百草枯中毒大鼠急性肺损伤时的炎症介质TNF-α的表达，改善肺组织的炎症反应。 【期刊名称】医药前沿 【年(卷),期】2019(009)012
【总页数】3
【关键词】【关键词】p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）；肿瘤坏死因子-α（TNF-α）；百草枯；急性肺损伤
百草枯（paraquat poisoning，PQ）是民间常用的廉价除草剂，除草效果好而被广泛应用，因此也成为了急诊病人常见的中毒原因之一[1]。既往研究发现，PQ中毒的病人早期即可发现肺组织的弥漫性炎症反应，以急性肺损伤病理变现为主，出现上皮细胞损伤，肺泡内的水肿和出血，大量的炎性细胞浸润，晚期导致以肺损伤为主的多器官功能障碍综合征[2]。百草枯中毒救治成功率低，致死率高达60%～90%。目前关于百草枯中毒的机制尚不明确，研究表明炎症反应失衡以及氧化应激是百草枯中毒的重要机制，本课题组前期研究发现肿瘤坏死因子TNF-α作为重要的炎症介质在百草枯中毒大鼠中是增高的[3]。p38属于MAPK家族中的一员，它作为上游的环境压力应激反应蛋白而能影响TNF-α的表达，关于p38 MAPK阻滞剂在百草枯中毒急性肺损伤大鼠中对TNF-α的影响的报导罕见，本研究将以百草枯灌胃来制作百草枯中毒急性肺损伤大鼠模型，应用p38 MAPK阻滞剂SB203580干预后，观察肺组织中TNF-α的变化。
1.资料与方法
1.1 实验动物
健康成年SPF级雄性SD大鼠36只，体重200～250g，由广西医科大学动物中心提供，动物使用许可证：SYXK桂2014-0003。饲养温度（20±2）℃，自由进水，普通饲料喂养。 1.2 主要试剂、药品和仪器
二氯百草枯结晶体（Sigma公司，美国），p38 MAPK阻滞剂SB203580，RNA保存液，RNA提取试剂盒，逆转录试剂盒购于TaKaRa公司，ELISA 试剂盒购于华美公司，目的基因引物序列设计合成由南宁科迪公司完成。目的基因碱基序列：β-actin上游引物5'-GGAGATTACTGCCCTGGCTCCTA-3'，下游引物5'-GACTCATCGTACTCCTGCTTGCTG-3'；TNF-α上游引物5'-GGCGTGTTCATCCGTTCTC-3'
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CTTCAGCGTCTCGTGTGTTTCT-3'；p38MAPK 上 游引 物GTGTCGGTGATGTCAGATGG-3'
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CAGTATGCAGTCCAGCTCCA-3'。病理图像分析系统（Leica公司，德国）。 1.3 方法
1.3.1 模型制作与分组 将36只大鼠按照随机数字法分成3组，其中生理盐水对照组（NS组）12只，百草枯模型组（PQ组）12只，p38 MAPK阻滞剂干预组（PQ＋SB组）12只。PQ组和PQ＋SB组均给予100mg/kg的百草枯一次性灌胃；NS组给予大鼠与百草枯等量的生理盐水灌胃。p38 MAPK阻滞剂组在灌胃后立即给予10mg/kg/天SB203580腹腔注射，并每24h重复给予SB203580一次，分别于灌胃后1d、3d后处死并留取标本，本实验动物处置方法符合动物伦理学标准。
1.3.2 标本采集 10%水合氯醛以0.03ml/kg进行腹腔注射麻醉，打开腹腔，腹主动脉放血处死，剖开颈部皮肤暴露气管，同时开胸暴露心肺及大血管，结扎左侧肺门以后使用10ml注射器吸取PBS缓冲液扎入右心室从而灌注冲洗肺中血液。取以下样本：①结扎左主支气管，行支气管肺泡灌洗（BALF），收集灌洗液于2000rpm离心15min，留取上清，并分装入 1.5ml EP管内置于-80℃
p38 MAPK阻滞剂对百草枯中毒急性肺损伤中TNF-α的影响
