p38 MAPK阻滞剂对百草枯中毒急性肺损伤中TNF-α的
影响
周志兵 张剑锋(通讯作者) 向沥 李霁 罗毅丰
【摘 要】【摘要】目的:探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)在百草枯中毒急性肺损伤中对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法:36只SD大鼠按随机数字法分为生理盐水组(NS组)、PQ中毒组(PQ组)、阻滞剂干预组(PQ+SB组),每组各12只,每组再从中各取第1天和第3天6只样本检测,通过观察肺组织病理学变化、肺泡灌洗液中炎症介质TNF-α变化,qRT-PCR法检测各组大鼠肺组织中TNF-α和p38 MAPK mRNA表达变化,以此来寻找环境压力应激反应蛋白p38 MAPK与肺组织炎症反应的相关性。结果:同一时间点的PQ组肺泡灌洗液中的TNF-α蛋白表达量显著高于NS组(P<0.05),而同一时间点PQ+SB组较PQ组肺泡灌洗液中的TNF-α蛋白表达量在第3天下降(P<0.05)。同一时间点的PQ组TNF-α和p38 MAPK的mRNA表达量显著高于NS组(P<0.05),同一时间点PQ+SB组较PQ组表达量下降(P<0.05)。而PQ组内不同时间点的肺组织中的TNF-α和p38 MAPK mRNA随时间增高(P<0.05);但PQ+SB组的TNF-αmRNA则无显著差异(P>0.05);肺组织病理学变化也显示同一时间点PQ组较NS组病理损伤明显,而PQ+SB组较PQ组病理损伤减少。结论:p38 MAPK抑制剂SB203580能够降低百草枯中毒大鼠急性肺损伤时的炎症介质TNF-α的表达,改善肺组织的炎症反应。 【期刊名称】医药前沿 【年(卷),期】2019(009)012
【总页数】3
【关键词】【关键词】p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK);肿瘤坏死因子-α(TNF-α);百草枯;急性肺损伤
百草枯(paraquat poisoning,PQ)是民间常用的廉价除草剂,除草效果好而被广泛应用,因此也成为了急诊病人常见的中毒原因之一[1]。既往研究发现,PQ中毒的病人早期即可发现肺组织的弥漫性炎症反应,以急性肺损伤病理变现为主,出现上皮细胞损伤,肺泡内的水肿和出血,大量的炎性细胞浸润,晚期导致以肺损伤为主的多器官功能障碍综合征[2]。百草枯中毒救治成功率低,致死率高达60%~90%。目前关于百草枯中毒的机制尚不明确,研究表明炎症反应失衡以及氧化应激是百草枯中毒的重要机制,本课题组前期研究发现肿瘤坏死因子TNF-α作为重要的炎症介质在百草枯中毒大鼠中是增高的[3]。p38属于MAPK家族中的一员,它作为上游的环境压力应激反应蛋白而能影响TNF-α的表达,关于p38 MAPK阻滞剂在百草枯中毒急性肺损伤大鼠中对TNF-α的影响的报导罕见,本研究将以百草枯灌胃来制作百草枯中毒急性肺损伤大鼠模型,应用p38 MAPK阻滞剂SB203580干预后,观察肺组织中TNF-α的变化。
1.资料与方法
1.1 实验动物
健康成年SPF级雄性SD大鼠36只,体重200~250g,由广西医科大学动物中心提供,动物使用许可证:SYXK桂2014-0003。饲养温度(20±2)℃,自由进水,普通饲料喂养。 1.2 主要试剂、药品和仪器
二氯百草枯结晶体(Sigma公司,美国),p38 MAPK阻滞剂SB203580,RNA保存液,RNA提取试剂盒,逆转录试剂盒购于TaKaRa公司,ELISA 试剂盒购于华美公司,目的基因引物序列设计合成由南宁科迪公司完成。目的基因碱基序列:β-actin上游引物5'-GGAGATTACTGCCCTGGCTCCTA-3',下游引物5'-GACTCATCGTACTCCTGCTTGCTG-3';TNF-α上游引物5'-GGCGTGTTCATCCGTTCTC-3'
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CAGTATGCAGTCCAGCTCCA-3'。病理图像分析系统(Leica公司,德国)。 1.3 方法
1.3.1 模型制作与分组 将36只大鼠按照随机数字法分成3组,其中生理盐水对照组(NS组)12只,百草枯模型组(PQ组)12只,p38 MAPK阻滞剂干预组(PQ+SB组)12只。PQ组和PQ+SB组均给予100mg/kg的百草枯一次性灌胃;NS组给予大鼠与百草枯等量的生理盐水灌胃。p38 MAPK阻滞剂组在灌胃后立即给予10mg/kg/天SB203580腹腔注射,并每24h重复给予SB203580一次,分别于灌胃后1d、3d后处死并留取标本,本实验动物处置方法符合动物伦理学标准。
1.3.2 标本采集 10%水合氯醛以0.03ml/kg进行腹腔注射麻醉,打开腹腔,腹主动脉放血处死,剖开颈部皮肤暴露气管,同时开胸暴露心肺及大血管,结扎左侧肺门以后使用10ml注射器吸取PBS缓冲液扎入右心室从而灌注冲洗肺中血液。取以下样本:①结扎左主支气管,行支气管肺泡灌洗(BALF),收集灌洗液于2000rpm离心15min,留取上清,并分装入 1.5ml EP管内置于-80℃
p38 MAPK阻滞剂对百草枯中毒急性肺损伤中TNF-α的影响
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