胶原性关节炎大鼠血清中TNF-α，IL-17及IL-10水平分
析
宋 光，裘红梅
【摘 要】摘要:［目的］检测血清TNF-α，IL-17及IL-10在Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠血清中的表达。［方法］建立CIA动物模型，用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测大鼠模型血清中炎性细胞因子TNF-α、IL-10及IL-17的水平，同时观察大鼠炎症指数。［结果］60只大鼠随机被分为造模组(40只)和对照组(20只)，免疫4周后，造模组40只大鼠有32只发病。造模成功组大鼠血清中TNF-α、IL-17水平分别为(39.65±11.23)pg/mL和(46.1±10.9)pg/mL，明显高于造模失败组和正常对照组(P 均＜0.05)，而IL-10水平(29.11±27.59)pg/mL明显低于造模失败组和正常对照组(P＜0.05)。另外，造模组大鼠血清TNF-α和IL-17水平与CIA大鼠炎症指数呈正相关关系(r=0.573，r=0.492，P＜0.05)，与之相反，CIA大鼠血清 IL-10水平与炎症指数呈负相关关系(r=-0.481，P＜0.05)。［结论］致炎因子(TNF-α，IL-17)和抑炎因子(IL-10)表达失衡可能在CIA发病中具有重要作用。 【期刊名称】大连医科大学学报 【年(卷),期】2012(034)005 【总页数】3
【关键词】关键词:胶原性关节炎;TNF-α;IL-17;IL-10;关节炎症指数
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种以关节滑膜炎为特征，以慢性、对称性、多发性关节炎为主要临床表现的一种自身免疫性疾病。迄今为止RA发病机制尚未完全阐明，但很多研究表明RA动物模型在关节炎症早期存在抑
炎症因子水平的降低及致炎症因子水平的升高［1-2］，即炎症因子的失衡与RA炎症过程有密切关系。本实验建立Ⅱ型胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠模型，检测其血清中TNF-α，IL-17和IL-10水平，并观察其与炎症指标的相关性。
1 材料和方法
1.1 实验动物及试剂
Wistar大鼠60只，清洁级动物，雌性，4～6周龄，体重为(160±15)g，购于大连医科大学实验动物中心。许可证号为SCXK(辽)2002-0002。卡介苗(长春生物制品研究所产品);羊毛脂(中国嘉定华亭羊毛脂厂产品);牛Ⅱ型胶原(typeⅡcollagen，CⅡ，美国Sigma公司产品)。检测大鼠血清中TNF-α，IL-17及IL-10水平的ElISA试剂盒(BioLegend公司)。 1.2 动物造模
60只大鼠随机分成两组:模型组40只，正常对照组20只。具体造模如下:弗氏完全佐剂的配制［3］:将液体石蜡和羊毛脂(2∶1)于70℃水浴中充分混匀，高压灭菌(121℃、30 min)制成弗氏不完全佐剂，4℃保存。使用时，将减毒卡介苗80℃ 灭活，与弗氏不完全佐剂混匀，制成弗氏完全佐剂，卡介苗的终浓度为10 mg/mL。将牛CII溶于0.05 mol/L乙酸，并与等体积弗氏完全佐剂混合制成混悬乳剂，CII终浓度2 mg/mL。造模组大鼠每只尾根部皮内注射200 μL上述乳剂，1周后，每只大鼠接受加强免疫，尾根部皮内注射乳化CII 100 μL，诱发 CIA。对照组大鼠以相同剂量相同部位注射生理盐水。 1.3 关节炎症指数评定
采用关节分数评分法记录多发性关节炎病变的发生及严重程度，CIA关节炎症的严重程度按照以下评分标准进行，分数越高，病情越重。每个肢体最高分为
4分，每只大鼠最高分为16分，记分标准分5级(0～4)，具体标准如下［4］:0分:无关节炎;1分:关节轻度肿胀;2分:关节部位中度肿胀;3分:严重肿胀;4分:严重肿胀且不能负重。
1.4 血清TNF-α、IL-17及IL-10水平的检测
大鼠心脏采血，离心取上清-20℃保存备用。检测血清TNF-α、IL-10、IL-17水平，具体操作按ELISA试剂盒说明进行。 1.5 统计学方法
采用SPSS 11.1统计软件，实验数据以(±s)表示，组间比较采用双侧t检验，用直线相关分析判断两指标间相关性;以P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 一般观察
正常对照组大鼠后腿，可观察到其表面显现正常的粉红色，脚踝无肿胀，足趾不增厚。在免疫8～12 d后，模型组大鼠开始出现症状。发病大鼠后腿可见脚踝明显肿胀，足趾明显增厚，整个后脚呈现红色或粉红色斑点。严重者可见紫色，且行走不便，不能负重。红肿逐渐消退逐渐出现关节强直、畸形以至功能障碍，表明慢性、对称性、多发性关节炎发生。40只免疫大鼠中，有32只发病明显;而对照无发病大鼠。发病大鼠活动量明显减少，食欲下降，体重低于正常组。
2.2 各组大鼠关节炎症指数评定
造模成功组关节炎指数与对照组和造模失败组比较，差异具有统计学意义(P＜0.05)。关节炎指数随时间延长逐渐增高，免疫4周及3周较免疫后10 d关节炎症更明显，差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表 1。
胶原性关节炎大鼠血清中TNF-α,IL-17及IL-10水平分析
