miRNA-136-5p对急性脊髓损伤模型大鼠炎症因子的作用
邓贵营1，2，曾高峰3，岑忠喜1，高云兵1，曹百川1，黄建华1，宗少晖1 (1广西医科大学第一附属医院脊柱骨病外科，广西壮族自治区南宁市 530021；2广西生物医药协同创新中心，广西医科大学，广西壮族自治区南宁市 530021；3广西医科大学公共卫生学院，广西壮族自治区南宁市 530021) 【摘 要】摘要 背景：miRNA-136-5p对脊髓损伤后病理改变、炎症反应和再生修复产生重要的调节作用。目的：观察miRNA-136-5p对大鼠脊髓损伤后血清细胞炎性因子、脊髓组织NF-κB蛋白的影响，探讨其作用分子机制。方法：SPF级雄性SD大鼠36只，购买于广西医科大学动物实验中心。制备慢病毒载体系统转染脊髓损伤大鼠。改良Allen’s法成功建立36只大鼠脊髓损伤模型，对大鼠进行Basso Beattie Brenham(BBB)评分，随机分成正常对照组、模型组(LV-ctrl +脊髓损伤组)、过表达组(脊髓损伤+ LV- miRNA-136-5p)、抑制组(脊髓损伤+LV-sponge抑制组)，每组9只。手术前7 d及手术当天过表达组、抑制组在损伤区连续注射慢病毒悬液，正常对照组、模型组注射等量生理盐水。各组在第1，3，7天分别处死3只大鼠，取血、脊髓组织。ELISA测定大鼠血清白细胞介素1β，白细胞介素6和干扰素α表达水平；Western Blot和双重免疫荧光检测NF-κB蛋白的表达。结果与结论：①术前BBB评分结果无显著差异(P ＞ 0.05)；脊髓损伤模型组大鼠活动表现为俯卧位缓慢行走，出现不同程度的尿潴留，双后肢的运动、感觉功能完全丧失，肌肉力量为0，出现脊髓休克；②与正常对照组相比，其他3组炎症因子水平均有升高(P ＜ 0.05)，过表达组各种炎症因子水平升高更加明显；各组炎症因子水平分别按过表达组、模型组、抑制组顺序逐渐递减；③Western Blot、双重免疫荧光检测NF-κB
蛋白表达水平，模型组、过表达组、抑制组均高于正常对照组(P ＜ 0.05)，其中过表达组表达水平最高；④结果提示，miRNA-136-5p对急性脊髓损伤大鼠炎症因子、NF-κB可产生影响。 【期刊名称】中国组织工程研究 【年(卷),期】2019(023)015 【总页数】6
【关键词】miRNA-136-5p；脊髓损伤；NF-κB；炎症因子 文章快速阅读：
邓贵营，男，1991年生，广西壮族自治区钦州市人，壮族，广西医科大学在读硕士，主要从事脊柱外科学方面的研究。
并列通讯作者：曾高峰，教授，博士生导师，广西医科大学公共卫生学院，广西壮族自治区南宁市530021 稿件接受：2018-12-24
文题释义：MicroRNAs(miRNAs)：是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA，其大小长20-25个核苷酸。成熟的miRNAs是由较长的初级转录物经过一系列核酸酶的剪切加工而产生的，随后组装进RNA诱导的沉默复合体，通过碱基互补配对的方式识别靶 mRNA，并根据互补程度的不同指导沉默复合体降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻译。
NF-κB：是真核细胞的转录因子，几乎存在于所有细胞中。在脊髓组织中，NF-κB主要存在于神经细胞、星形胶质细胞、少突胶质细胞和小胶质细胞中。 主题词：微小RNAs；脊髓损伤；NF-κB；组织工程
基金资助：国家自然科学基金(81560351)，项目负责人：宗少晖；广西高等学
校高水平创新团队及卓越学者计划资助，项目负责人：宗少晖
Deng Guiying, Master candidate, Department of Spinal Osteopathy, the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University, Nanning 530021, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China;Guangxi Collaborative Innovation Center for Biomedicine, Guangxi Medical University, Nanning 530021, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China
0 引言 Introduction
脊髓损伤引起原发性脊髓组织坏死、细胞溶解及继发性损害，对中枢神经系统造成严重影响，降低患者的生活质量。临床表现为损伤面以下的运动感觉功能、括约肌功能完全或不完全丧失[1-2]。脊髓损伤发生后，会出现病理生理过程复杂多变，包括组织缺血性水肿、局部免疫炎症反应、神经元大量坏死等微环境的改变。在临床治疗中脊髓损伤常用手术和药物联合使用的治疗方法，目的是减少继发性损伤，促进神经恢复和再生[3-5]。然而，到目前为止，没有一种方法在脊髓损伤的治疗上取得显著疗效。
微小RNA(miRNA)通过与互补mRNA序列的3'非翻译区(3'-UTR)结合来调节转录后mRNA表达，导致翻译抑制和基因沉默[6]。数以千计的人类蛋白质的转录、翻译等编码基因过程受miRNA的严格调控，扮演许多重要生物过程的“主要调节因子”。据文献报道，miRNA在调节细胞增殖、分化、凋亡、炎症反应、自身免疫性疾病和癌症的诱导中起一定作用[7-10]。序列分析表明超过1/3的人类基因受miRNA直接调节，如miR-106b-25，miR-221，miR-103，miR-17-92a，miR-222等逐渐成为研究的热点，甚至已成为癌症诊断和预后评估的标志之一[11-13]。研究发现，miR-223，miR-181a，miR-146，
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