猪TLR7基因胞外区部分片段的克隆、表达及其重组蛋白的纯化分析

猪TLR7基因胞外区部分片段的克隆、表达及其重组蛋白

的纯化分析

和燕玲;房永祥;陈国华;刘磊;景志忠

【期刊名称】《安徽农业科学》 【年(卷),期】2009(037)024

【摘要】[目的]获得高表达量的蛋白,为进一步研制单克隆抗体提供较好的免疫原,同时也可为TLR7胞外区该片断蛋白未知区域的结构和功能研究奠定基础.[方法] 应用PCR技术从重组质粒pcDNA3.1/CT-GFP-pTLR7上扩增出编码猪TLR7基因胞外区N端第27～202位氨基酸序列,利用BamHⅠ和HindⅢ酶切位点将其插入到原核表达载体PET30a 中,重组质粒转化BL21(DE3)后,在不同条件下诱导表达.[结果] 经SDS-PAGE分析表明,重组菌表达出约26 kD的融合蛋白,并证实主要以包涵体形式表达,其最佳诱导表达条件是37 ℃、0.5 mmol/L IPTG诱导6 h,表达量可接近50%;纯化的重组蛋白免疫小鼠后,间接ELISA检测抗体效价,结果该蛋白免疫BALB/c小鼠效价达105 .[结论] TLR7胞外区该片断重组蛋白具有很好的抗原性,可以作为单克隆抗体研制的免疫原. 【总页数】4页(11450-11452,11463)

【关键词】猪TLR7胞外区片段;重组蛋白;抗原性 【作者】和燕玲;房永祥;陈国华;刘磊;景志忠

【作者单位】中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,农业部兽医公共卫生重点实验室,甘肃省动物寄生虫病重点实验室,甘肃兰州,730046;甘肃农业大学,甘肃兰州,730070;中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,农业部兽医公共卫生重点实验室,甘肃省动物