2016年全国职业技能竞赛 微生物检验项目操作细则
本赛项依据GB 4789.2-2010 菌落总数测定 进行
一、 样品：染菌牛乳 二、 菌落总数测定过程
1.样品的稀释
1.1 以无菌吸管吸取25mL样品置于盛有225mL生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠），充分混匀，制成1:10的样品匀液。
1.2.用1mL无菌吸管吸取1:10稀释液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中，振摇试管使其混匀，制成1:100的稀释液。
1.3 按1.2.操作程序，制备10倍稀释样品匀液，每递增稀释一次，换用一次1mL灭菌吸管。 1.4每个稀释度分别吸取1mL样品匀液加入两个无菌培养皿内。同时做空白对照。 1.5将适温的平板计数琼脂培养基（已放置于水浴锅保温）倾注培养皿，并混合均匀。 1.6待琼脂凝固后，翻转培养皿，置36℃±1℃恒温箱内培养24h±1h。 2. 菌落计数及报告
按菌落计数方法进行菌落计数，并报告。
三、 革兰氏染色及镜检
1. 革兰氏染色操作
1.1 制片：在酒精灯旁，从菌落总数平板中挑选单独菌株在一块载玻片上进行涂片，再干燥和固定。 1.2 染色：再进行初染、媒染、脱色及复染。每人限染色两个玻片， 1.3 镜检：用油镜观察，自行选取最佳视野展示给裁判。 2.报告：报告观察到菌体形态及颜色，并判断。
四、 仿真软件的操作：
致病菌——金黄色葡萄球菌的检测，参考GB 4789.10-2010 （第一法），由东方仿真软件公司提高演示版本，以供各参赛院校备赛。
五、 考试安排
1、 菌落总数的测定：第一天上午，在超净台前完成 2、 仿真软件的操作：第一天下午，机房。
3、 菌落计数及革兰氏染色：第二天上午，在超净台前完成；镜检在显微镜室进行。
问题说明
1、 样品按指定稀释度进行稀释，无需选手选择。
2、 所需培养基、生理盐水等试剂均配制好并灭菌备用，数量足够。 3、 各实验所需试剂用品均会有清楚的标识，以备选手使用。
4、 吸量管分别为10mL、1mL，报纸单独包扎并灭菌备用，数量足够；吸球插在吸量管上使用。 5、 染色时提供木质试管夹，在废液缸上进行。
6、 菌落计数用肉眼观察，不提高菌落计数器，不提供计算器，可提供草稿纸。 7、 培养后的培养基类废弃物由我院统一灭菌处理。 8、 显微镜为电光源的双筒光学显微镜。
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2016年全国职业技能竞赛
