北京地区儿童急性上呼吸道感染中肠道病毒感染谱的分析

北京地区儿童急性上呼吸道感染中肠道病毒感染谱的分析

李霖琳1，谢正德2，刘春艳2，相子春1，任丽丽1，申昆玲2，王健伟1*

【摘 要】摘要：目的 了解北京地区儿童急性上呼吸道感染中肠道病毒(EV)的感染谱。方法 收集2009-05-09于北京儿童医院就诊的急性上呼吸道感染患者的咽拭子1 121份，用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法对EV的VP1基因进行了扩增并测序。结果 发现55例为EV阳性，分属14个血清型。其中44例属于A种EV(EV-A)，11例为EV-B。检出EV与手足口病及无菌性脑膜炎中检测到的EV具有高度同源性，但和EV原型株相比较均产生了不同程度的变异。结论 2009年北京地区急性上吸道感染儿童中以EV-A感染为主，与成人病原谱存在差异。

【期刊名称】基础医学与临床 【年(卷),期】2014(034)004 【总页数】5

【关键词】 肠道病毒；呼吸道感染；感染谱

肠道病毒(enteroviruses, EV)是单股正链无包膜的小RNA病毒，属于小RNA病毒科肠道病毒属。人EV分为A、B、C和D 4个种。EV-A包括24个血清型，EV-B包括61个血清型，EV-C包括23个血清型，EV-D包括5个血清型 (www.picornaviridae.com/enterovirus/)。EV可以引起呼吸道感染、无菌性脑膜炎、心肌炎和手足口病等多种疾病。

近年来，EV在呼吸道感染中的作用受到了广泛重视，认为是中国儿童呼吸道感染的重要病原体、夏季呼吸道感染的主要病原体[1-4]。而由于EV的血清型众多，哪些血清型与呼吸道感染相关尚未阐明，国内以往的报道却未对呼吸道感

染中检测到的EV进行分型研究。本研究对北京地区儿童上呼吸道感染的临床EV感染样本进行了检测和分型，以进一步了解EV血清型与呼吸道感染间的关系。

1 材料与方法

1.1 病例来源

2009-05-09首都医科大学附属北京儿童医院门诊临床诊断为急性呼吸道感染的患儿共1 121例，其中男632例，女489例(男∶女=1.3∶1)。年龄分布为1个月～17岁，年龄中位数为38个月。 1.2 方法

1.2.1 标本采集:采集患者咽拭子，置4 ℃保存，72 h内运至实验室分装，冻存于-70 ℃。

1.2.2 核酸提取:自动核酸提取仪NucliSens easyMAGTM(法国生物梅里埃)进行DNA和RNA提取，保存于-70 ℃。

1.2.3 病毒核酸检测:多重反转录聚合酶链反应(multiplex RT-PCR)进行常见呼吸道病毒核酸检测，包括流感病毒甲、乙、丙型(influenza viruses, IFV A、B、C)、副流感病毒1～4型(parainfluenza virus, PIV 1～4)、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)、鼻病毒(rhinovirus, HRV)、偏肺病毒(human metapneumovirus, hMPV)、腺病毒(adenovirus, AdV)、人冠状病毒(human coronavirus, HCoV)、博卡病毒(human bocavirus, HBoV)和EV。详细检测方法和引物序列见文献[5]。

1.2.4 EV的分型检测:RT-PCR方法扩增EV的VP1区，详细检测方法和引物见文献[6]。对扩增的产物进行T-A克隆后测序。和EV各血清型的原型株进行序

列比对，VP1 区核苷酸同源性≥75%或氨基酸同源性≥88%，即认为是同一血清型[7]。

1.2.5 生物信息学分析:BioEdit 7.0.0版本进行多序列比对。Mega4.0软件构建进化树, 采用Kimura 2-parameter模型以邻接法(neighbor-joining), 建树的可靠性由1000 Bootstrap值评估。

2 结果

2.1 EV检出情况

共检测到55例EV阳性的急性上呼吸道感染患儿。其中男32例，女23例(男∶女=1.4∶1)。年龄分布为9个月～10岁，年龄中位数是38个月。除5月份外，EV在筛查的各个月份(6月到9月)均有检出，其中以8月检出率最高，达到10.1%。不同月份检出率见(表1)。

55例EV阳性的患儿中，12例存在与其他呼吸道病毒共感染的情况。其中1例与hMPV共感染、1例与IFVB共感染、1例与PIV4共感染、1例与HRV共感染、2例与RSV共感染、2例与ADV共感染、3例与PIV3共感染，1例与PIV1和HRV共感染。 2.2 EV的分型

在55例EV阳性的病例中，只检测到A和B两个种。EV-A阳性44例，包括7个血清型；EV-B阳性11例，包括7个血清型(图1)。EV-A阳性病例中柯萨奇病毒(CV)A2和CVA6最多，各有10例；CVA12和CVA5分别为9例和8例；CVA10有4例，CVA8有2例，CVA16有1例。EV-B阳性的病例中CVB2最多，有4例；其次为CVA9，2例；CVB1、 CVB5、埃可病毒(E)6、E19和E25各1例。在检出率最高的8月份， 17例EV阳性分属10个血清型。