YL-20430连翘原料检验操作规程

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检验操作规程

题目：连翘原药材检验操作规程 编号：TS-GC-YL-20432-00 制定人： 制定日期2020 年 月 日 版本：2 页数：1/5 审核人： 审核日期2020 年 月 日 颁发部门：质 量 部 批准人： 批准日期2020年 月 日 生效日期2020 年 月 日 目的：规范连翘原药材检验操作 范围：连翘原药材检验 分发部门： 质量部、 化验室、生产部 标 题 正 文 1 标准依据：《中国药典》2020年版一部及四部 2 【性状】 2.1 仪器：直尺。 2.2 方法：取本品,置日光下观察,并用直尺测量:本品呈长卵形至卵形，稍扁， 长1.5～2.5cm，直径0.5～1.3cm。表面有不规则的纵皱纹和多数突起的小斑点，两面各有1条明显的纵沟。顶端锐尖，基部有小果梗或已脱落。青 翘多不开裂，表面绿褐色，突起的灰白色小斑点较少；质硬；种子多数， 黄绿色，细长，一侧有翅。老翘自顶端开裂或裂成两瓣，表面黄棕色或红 棕色，内表面多为浅黄棕色，平滑，具一纵隔；质脆；种子棕色，多已脱 落。气微香，味苦。 【鉴别】 3 （1）显微鉴别 3.1 仪器与试剂：生物显微镜、酒精灯，水合氯醛、稀甘油等。 3.1.1 方法：取本品适量，用水合氯醛装片，置显微镜下观察：（1）本品果 3.1.3 皮横切面：外果皮为1列扁平细胞，外壁及侧壁增厚，被角质层。中果皮 外侧薄壁组织中散有维管束；中果皮内侧为多列石细胞，长条形、类圆形 或长圆形，壁厚薄不一，多切向镶嵌状排列。内果皮为1列薄壁细胞。 (2)薄层鉴别 3.2 3.2.1 仪器与试剂：分析天平、数显恒温水浴锅、电热鼓风干燥箱、层析缸、硅胶G 薄层板、甲醇、石油醚（30～60℃）、三氯甲烷、连翘对照药材等。 方法：（2）取本品粉末lg，加石油醚（30?60℃）20ml，密塞，超声3.2.2 处理15分钟，滤过，滤液回收溶剂至干，残渣加乙醇5ml使溶解，作为供 试品溶液。另取连翘对照药材吨，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法 （通则0502）试验，吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层 板上，以环己烷-甲酸乙酯-甲酸（15:10:0.25）为展开剂，展开，取出，晾 干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及 紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置 上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光下显相同颜色的荧光斑点 【检查】 4 杂质 青翘不得过3%；老翘不得过9%（通则 2301）。 4.1 仪器：分析天平、药筛。 4.1．1 方法：取本品适量,挑拣果核、果梗，合并称重杂质量。 4.1.2 计算公式: 4.1.3

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4.2 4.2.1 4.2.2 4.2.3 4.3 4.3.1 4.3.2 4.3.3 4.4 4.4.1 4.4.2

杂质量= M1 ×100% M0 式中: M0-------供试品重(g) M1-------杂质重(g) 水分 不得过10.0%（通则0832第四法）。 仪器与试剂：水分测定装置、分析天平、圆底烧瓶、甲苯。 方法：取供试品适量，精密称定，置圆底烧瓶中，加甲苯约200ml，必要时加入干燥、洁净的无釉小瓷片数片或玻璃珠数粒，连接仪器，自冷凝管顶端加入甲苯至充满水分测定管的狭细部分。将短颈圆底烧瓶置电热套中或用其他适宜方法缓缓加热，待甲苯开始沸腾时，调节温度，使每秒馏出2滴。待水分完全馏出，即测定管刻度部分的水量不再增加时，将冷凝管内部先用甲苯冲洗，再用饱蘸甲苯的长刷或其他适宜方法，将管壁上附着的甲苯推下，继续蒸馏5分钟，放冷至室温，拆卸装置，如有水黏附在水分测定管的管壁上，可用蘸甲苯的铜丝推下，放置使水分与甲苯完全分离（可加亚甲蓝粉末少量，使水染成蓝色，以便分离观察）。检读水量，并计算成供试品的含水量（％）。 计算公式： V 含水量% = ×100% W样 式中： V --------------- 检读数量ml。 W样 --------------- 样品重量g。 总灰分 不得过4.0％（通则2302）。 仪器：粉碎机、药筛、分析天平、坩埚、箱式电阻炉等。 方法：取供试品2～3g，过二号筛混合均匀后，置炽灼至恒重的坩埚中称定重量，缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500～600℃，使完全灰化至恒重。根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量（%）。 计算公式： W1-W0 总灰分% = ×100% W样 式中： W0 ----------- 坩埚重量(g)。 W1----------- 坩埚与灰分的重量(g)。 W样----------- 样品的重量(g)。 二氧化硫残留量：照二氧化硫残留量测定法（通则 2331)测定，不得过150mg/kg 仪器与试剂：两颈圆底烧瓶、电热套、竖式回流冷凝管、磁力搅拌器、分析天平、甲基红乙醇溶液指示剂、氢氧化钠滴定液滴、盐酸溶液（6mol/L)等。 方法：测定法取药材或饮片细粉约10g(如二氧化硫残留量较髙，超过1000mg/kg，可适当减少取样量，但应不少于5g),精密称定，置两颈圆底烧瓶中，加水300?400ml。打开回流冷凝管开关给水，将冷凝管的上端二氧 第 2 页 共 5 页

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4.4.3 5 5.1 5.2 5.3 6 6.1 6.1.1

化硫气体导出口处连接一橡胶导气管置于100ml锥形瓶底部。锥形瓶内加入3%过氧化氢溶液50ml作为吸收液（橡胶导气管的末端应在吸收液液面以下）。使用前，在吸收液中加人3滴甲基红乙醇溶液指示剂（2.5mg/ml),并用0.Olmol/L氢氧化钠滴定液滴定至黄色（即终点；如果超过终点，则应舍弃该吸收溶液）。开通氮气，使用流量计调节气体流量至约0.2L/min；打开分液漏斗的活塞，使盐酸溶液（6mol/L)10ml流入蒸馏瓶，立即加热两颈烧瓶内的溶液至沸，并保持微沸；烧瓶内的水沸腾1.5小时后，停止加热。吸收液放冷后，置于磁力搅拌器上不断搅拌，用氢氧化钠滴定（O.Olmol/L)滴定，至黄色持续时间20秒不褪，并将滴定的结果用空白实验校正。 计算公式： （V供-V空）×C×0.032×106 二氧化硫残留量（mg/kg） = W供 式中： V供为供试品溶液消耗氢氧化钠滴定液的体积，ml； V空 为空白消耗氢氧化钠滴定液的体积，ml； C 为氢氧化钠滴定液的浓度，mol/L； W供为供试品的重量，g。 0.032为lml氢氧化钠滴定液（lmol/L)相当的二氧化硫的质量，g。 【浸出物】 照醇溶性浸出物测定法（通则2201）项下的冷浸法测定，用65%乙醇作溶剂，青翘不得少于30.0%；老翘不得少于16.0%。 仪器与试剂：电热鼓风干燥箱、分析天平、数显恒温水浴锅、乙醇等。 方法：取供试品约4g，精密称定，置250～300ml的锥形瓶中，精密加65％乙醇100ml，密塞，冷浸，前6小时内时时振摇，再静置18小时，用干燥滤器迅速滤过，精密量取续滤液20ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量。除另有规定外，以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量（％）。 计算公式： （W1-W0）×V0 浸出物% = ×100% W样×（1－水分）×V1 式中： W0 ------- 蒸发皿的重量（g）。 W1 -------- 浸出物与蒸发皿的重量（g）。 W样------- 样品的重量（g）。 V0------- 加溶媒体积 （ml）。 V1------- 取续滤液的体积 （ml）。 【含量测定】 连翘苷 照高效液相色谱法（通则0512）测定。 仪器与试剂：高效液相色谱仪、超声波清洗仪、数显恒温水浴锅、连翘苷对照品、甲醇、等。 第 3 页 共 5 页

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6.1.2 6.1.3 连翘苷 照高效液相色谱法（通则0512）测定。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（25：75）为流动相；检测波长为277nm。理论板数按连翘苷峰计算应不低于3000。 对照品溶液的制备 取连翘苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备 取本品粉末（过五号筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇15ml，称定重量，浸渍过夜，超声处理（功率250W，频率40kHz）25分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，蒸至近干，加中性氧化铝0.5g拌匀，加在中性氧化铝柱（100～120目，1g，内径为1～1.5cm）上，用70%乙醇80ml冼脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣用50%甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 本品按干燥品计算，含连翘苷（C27H34O11）不得少于 0.15%。 计算公式： A样 × C对 ×f 含量% = ×100% m ×（1－水分）×A对 式中： A样 ------------------------- 样品的面积。 A对 ------------------------ - 对照品的面积。 C对 ------------------------- 对照品的浓度(mg/ml)。 m ------------------------- 样品的重量（g）。 f ------------------------- 稀释体积)。 6.2.1 连翘酯苷A 照高效液相色谱法（通则0512）测定。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以 乙腈-0.4%冰醋酸溶液（15：85）为流动相；检测波长为330nm。理论板数 按连翘酯苷A峰计算应不低于5000。 对照品溶液的制备 取连翘酯苷A对照品适量，精密称定，加甲醇制 成每1ml含0.1mg的溶液，即得（临用配制）。 供试品溶液的制备 取本品粉末（过五号筛）约0.5g，精密称定，置

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6.2.2 具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇15ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 本品按干燥品计算，青翘含连翘酯苷A（C29H36O15）不得少于3.5%；老翘含连翘酯苷A（C29H36O15）不得少于0.25% 计算公式： A样 × C对 ×f 含量% = ×100% m ×（1－水分）×A对 式中： A样 ------------------------- 样品的面积。 A对 ------------------------ - 对照品的面积。 C对 ------------------------- 对照品的浓度(mg/ml)。 m ------------------------- 样品的重量（g）。 f ------------------------- 稀释体积)。 5.3 挥发油 照挥发油测定法 （ 通则 2204 甲法 ） 测定 。 本品青翘含挥发油不得少于 2.0% （ ml/g ） 5.3.1 仪器与试剂：分析天平、挥发油提取装置、电热套、等。 5.3.2 方法：取本品约5mm的短段适量，称定重量（准确至0.O1g），置烧 瓶中，每100g供试品加水600ml，与玻璃珠数粒，振摇混合后，连接 挥发油测定器与回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器 的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。置电热套中或用其他适宜方法缓 缓加热至沸，并保持微沸约3小时，至测定器中油量不再增加，停止 加热，放置片刻，开启测定器下端的活塞，将水缓缓放出，至油层上 端到达刻度0线上面5mm处为止。放置1小时以上，再开启活塞使油 层下降至其上端恰与刻度0线平齐，读取挥发油量，并计算供试品中 挥发油的含量（％） 5.3.3 计算公式: V0 挥发油= ×100% 式中: W样 W样------- 样品的重量（g）。 V0------- 读取挥发油体积 （ml）。

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