-1542 ?广东医学 2019 年6 月 第40 卷第 11 期 Guangdong Medical Journal Jun. 2019, Vol. 40, No. 11VEGF和Bel -2双基因修饰的MSC对缺氧心肌
细胞凋亡的影响倪晓彬'，蔡志雄'，李和慨2,易敏2'汕头市中心医院心血管内科(广东汕头515031)； 2南方医科大学珠江医院心脏中心(广东广州510280)【摘要】 目的 探讨VEGF和Bel-2双基因修饰的骨髓.间充质干细胞(MSC)对缺氧心肌细胞的作用及
机制。方法 原代培养新生Sprague - Dawley大鼠心肌细胞，使用Transwell共培养系统将心肌细胞与MSC或 MSC + BV置于1 %0, 24 h缺氧处理。实验分组：正常培养组、缺氧培养组、与MSC共培养缺氧组、与MSC + BV共培养缺氧组。采用TUNEL染色法、Annexin V - FITC/PI流式细胞术分析心肌细胞凋亡。结果 TUNEL
染色及流式细胞术结果均表明缺氧增加了心肌细胞凋亡，与MSC共培养缺氧组心肌细胞较对照组凋亡减少
(P<0.05),而与MSC + BV共培养缺氧组心肌细胞对比与MSC共培养缺氧组凋亡更少，差异有统计学意义
(P<0.01)。结论 VEGF和Bcl-2双基因修饰的MSC通过旁分泌效应减少缺氧心肌细胞凋亡。【关键词】Bcl-2； VEGF；骨髓间充质干细胞；旁分泌；缺氧；心肌细胞【中图分类号】R542.2； R364.4
【文献标志码】ADOI: 10. 13820/j. cnki. gdyx. 20190787Bel - 2 and VEGF dual genetic co - overexpressing mesenchymal stem cells protect cardiomyocytes under hypoxia in vitro via paracrine effect. NI Xiao - bin \ , CAI Zhi - xiong, LI He - kai, YI Min. * Department of Cardiology,
Shantou central hospital, Shantou 515031 , Guangdong, China[Abstract ] Objective To investigate the protective effect of Bel - 2 and VEGF dual genetic co - overexpressing
mesenchymal stem cells ( MSCs) on cardiomyocytes under anoxic in vitro and its mechanism. Methods Neonatal SD rat cardiomyocytes were cultured in vitro. Cardiomyocytes were co - cultured with either MSC 一 GFP or MSC - BV using Tran? swell coculture system. The condition of 94% N2, 5% C02, 1% 02, for 24 h was used. Cells were divided into four
groups, normal culture group, hypoxia culture group, coculture with MSC - GFP group, and coculture with MSC + BV group. Flow cytometric assay and TUNEL assay were used to analyzed the apoptosis of cardiomyocytes. Results Flow cy-
tometric assay and TUNEL assay showed that the apoptosis of cardiomyocytes that cocultured with Bel - 2 and VEGF dual genetic modification MSC under hypoxia condition was significantly reduced. Conclusion Bel - 2 and VEGF dual genetic co - overexpressing MSCs protect cardiomyocytes under hypoxia in vitro via paracrine effect.[Key words] Bel -2； VEGF； mesenchymal stem cell； paracrine； hypoxia； cardiomyocytes心肌梗死是导致人类死亡的主要疾病之一⑷O
年3月，我们将VEGF和Bci-2双基因修饰的MSC 与新生SD大鼠心肌细胞共培养并缺氧处理24 h, 研究其是否能减少缺氧心肌细胞的凋亡。骨髓间充质干细胞(MSC)移植治疗心肌梗死很有
发展及应用前景，但临床试验的结果显示这种细胞 移植的方法对心肌梗死的治疗效果不太理想，其主 要原因之一是移植到梗死局部区域的MSC存活及 滞留率低[2-4]o要使MSC移植发挥对心肌梗死更
1材料与方法1. 1材料SD大鼠MSC购自中国Cyagen公司；
好的治疗作用必须改善MSC在梗死局部区域的存
VEGF和Bel-2双基因修饰的MSC(MSC + BV)为 本实验室之前所构建并保存⑻；出生1 ~3 d的新生 SD大鼠购自南方医科大学实验动物中心。1.2主要试剂与仪器活及滞留率。Bcl-2是调控细胞存活和凋亡的重
要基因[5-6]o VEGF是重要的促血管生成细胞因 子,VEGF对增强心肌梗死后心脏局部血管新生和 改善心功能的作用已得到证实门】。在之前的研究 中我们成功构建了 VEGF和Bcl-2双基因修饰的 MSC,体外实验结果证实其在糖氧剥夺环境下能更
1.2.1主要试剂胎牛血清、胰蛋白酶、PBS(In-
vitrogen) ,DMEM、青霉素-链霉素(Gibco),DAPI 染
色液(Sigma) ,TUNEL 染色试剂盒(Roche)、Annexin V - FITC/PI 试剂盒(eBioscience) o强旁分泌多种细胞因子⑻。2016年10月至2017
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