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检验操作规程
题目：水蛭原药材检验操作规程 编号：TS-GC-YL-60050-02 制定人： 制定日期2020 年 月 日 版本：2 页数：1/4 审核人： 审核日期2020 年 月 日 颁发部门：质 量 部 批准人： 批准日期2020年 月 日 生效日期2020 年 月 日 目的：规范水蛭原药材检验操作 范围：水蛭原药材检验 分发部门： 质量部、 化验室、生产部 标 题 正 文 1 标准依据：《中国药典》2020年版一部及四部 2 【性状】 2.1 仪器：直尺。 2.2 方法：取本品,置日光下观察,并用直尺测量:蚂蟥 呈扁平纺锤形，有 多数环节，长4～10cm，宽0.5～2cm。背部黑褐色或黑棕色，稍隆起，用水浸后，可见黑色斑点排成5条纵纹；腹面平坦，棕黄色。两侧棕黄色， 前端略尖，后端钝圆，两端各具1吸盘，前吸盘不显著，后吸盘较大。质 脆，易折断，断面胶质状。气微腥。 水蛭 扁长圆柱形，体多弯曲扭转，长2～5cm，宽0.2～0.3cm。 柳叶蚂蟥 狭长而扁，长5～12cm，宽0.1～0.5cm。 【鉴别】 3 薄层鉴别 3.1 仪器与试剂：分析天平、硅胶G薄层板、乙醇、环己烷、乙酸乙酯等。 3.1.1 方法：取本品粉末1g，加乙醇5ml，超声处理15分钟，滤过，取滤液3.1.2 作为供试品溶液。另取水蛭对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层 色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯（4：1）为展开剂，展开，取出，晾干， 喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在 与对照药材色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点；紫外光灯（365nm） 下显相同的橙红色荧光斑点。 【检查】 4 水分 不得过18.0%（通则0832第二法）。 4.1 仪器：电热鼓风干燥箱、分析天平、粉碎机、药筛等。 4.1.1 方法：取供试品2-5g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超4.1.2 过5mm，疏松供试品不超过10mm，精密称定，打开瓶盖在100－105℃干燥 5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却30分钟，精密称定重量，再在 上述温度干燥1小时，冷却，称重至连续两次称重的差异不超过5mg为止。 根据减失的重量，计算供试品中的含水量（%）。 4.1.3 计算公式： W样+W0－W1 样品含水量% = ×100% W样 式中： W0 ---------------------------- 称量瓶的重量（g）。
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W1 --------------------------- 称量瓶与样品的重量（g）。 W样 --------------------------- 样品的重量（g）。 4.2 总灰分 不得过8.0％（通则2302）。 4.2.1 仪器：粉碎机、药筛、分析天平、坩埚、箱式电阻炉等。 4.2.2 方法：取供试品2～3g，过二号筛混合均匀后，置炽灼至恒重的坩埚中 称定重量，缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500～ 600℃，使完全灰化至恒重。根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量（%）。 4.2.3 计算公式： W1-W0 总灰分% = ×100% W样 式中： W0 ----------- 坩埚重量(g)。 W1----------- 坩埚与灰分的重量(g)。 W样----------- 样品的重量(g)。 4.3 酸不溶性灰分 不得过2.0%（通则2302）。 4.3.1 方法：取上述灰分，加入稀盐酸10ml，用表面皿覆盖坩埚，置水浴上加 热10分钟，表面皿用热水5ml冲洗，洗液并入坩埚中，用无灰滤纸滤过， 坩埚内的残渣用水洗于滤纸上，并洗涤至洗液不显氯化物反应为止，滤渣 连同滤纸移至同一坩埚中，干燥，炽灼至恒重。根据残渣重量，计算供试 品中酸不溶性灰分的含量（%）。 4.3.2 计算公式： W1－W0 酸不溶性灰分% = × 100% W 式中: W0----------- 坩埚的重量（g）。 W1----------- 酸不溶性灰分与坩埚的重量（g） W样---------- 样品的重量（g）。 酸碱度 照pH值测定法（通则0631）测定，应为5.0～7.5。 4.4 仪器与试剂：分析天平、氯化钠、PHS-3C型酸度计、等。 4.4.1 4.4.2 方法： 取本品粉末（过三号筛）约1g，加入0.9%氯化钠溶液10ml， 充分搅拌，浸提30分钟，并时时振摇，离心，取上清液，照pH值测定法 （通则0631）测定，应为5.0～7.5。 4.5 黄曲霉毒素 照真菌毒素测定法（通则2351）测定。 本品每1000g含黄曲霉毒素B1不得过5μg，黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素 G1、黄曲霉毒素B2和黄曲霉毒素B1的总量不得过10μg。 4.5.1 仪器与试剂：光化学衍生器、离心机、荧光检测器检测等 本法系用高效液相色谱法（通则0512）测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒 素（以黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2总 样 第 2 页 共 10 页
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4.5.2 4.5.3 4.5.4
量计），除另有规定外，按下列方法测定。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水（40:18:42）为流动相；采用柱后衍生法检测，①碘衍生法：衍生溶液为0.05%的碘溶液（取碘0.5g，加入甲醇100ml使溶解，用水稀释至1000ml制成），衍生化泵流速每分钟0.3ml，衍生化温度70℃；②光化学衍生法：光化学衍生器（254nm）；以荧光检测器检测，激发波长λex=360nm（或365nm），发射波长λex=450nm。两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。 混合对照品溶液的制备 精密量取黄曲霉毒素混合对照品溶液（黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2标示浓度分别为1.0μg/ml、0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml）0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为贮备溶液。精密量取贮备溶液1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。 供试品溶液的制备 取供试品粉末约15g（过二号筛），精密称定，置于均质瓶中，加入氯化钠3g，精密加入70%甲醇溶液75ml，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11000转/分钟），离心5分钟（离心速度2500转/分钟），精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，量取续滤液20.0ml，通过免疫亲合柱，流速每分钟3ml，用水20ml洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置2ml量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 测定法 分别精密吸取上述混合对照品溶液5μl、10μ1、15μl、20μl、25μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线。另精密吸取上述供试品溶液20～25μ1，注入液相色谱仪，测定峰面积，从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2的量，计算，即得。 第 3 页 共 10 页
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4.6 4.6.1 4.6.2 计算公式：X=(A供?b)?f?1000k?M样?V 二氧化硫残留量：照二氧化硫残留量测定法（通则 2331)测定，不得过150mg/kg 仪器与试剂：两颈圆底烧瓶、电热套、竖式回流冷凝管、磁力搅拌器、分析天平、甲基红乙醇溶液指示剂、氢氧化钠滴定液滴、盐酸溶液（6mol/L)等。 方法：测定法取药材或饮片细粉约10g(如二氧化硫残留量较髙，超过1000mg/kg，可适当减少取样量，但应不少于5g),精密称定，置两颈圆底烧瓶中，加水300?400ml。打开回流冷凝管开关给水，将冷凝管的上端二氧 化硫气体导出口处连接一橡胶导气管置于100ml锥形瓶底部。锥形瓶内加 入3%过氧化氢溶液50ml作为吸收液（橡胶导气管的末端应在吸收液液面以 下）。使用前，在吸收液中加人3滴甲基红乙醇溶液指示剂（2.5mg/ml), 并用0.Olmol/L氢氧化钠滴定液滴定至黄色（即终点；如果超过终点，则 应舍弃该吸收溶液）。开通氮气，使用流量计调节气体流量至约0.2L/min； 打开分液漏斗的活塞，使盐酸溶液（6mol/L)10ml流入蒸馏瓶，立即加热两 颈烧瓶内的溶液至沸，并保持微沸；烧瓶内的水沸腾1.5小时后，停止加 热。吸收液放冷后，置于磁力搅拌器上不断搅拌，用氢氧化钠滴定 （O.Olmol/L)滴定，至黄色持续时间20秒不褪，并将滴定的结果用空白实 验校正。 4.6.3 计算公式： 6 （V供-V空）×C×0.032×10 二氧化硫残留量（mg/kg） = W供 式中： V供为供试品溶液消耗氢氧化钠滴定液的体积，ml； V空 为空白消耗氢氧化钠滴定液的体积，ml； C 为氢氧化钠滴定液的浓度，mol/L； W供为供试品的重量，g。 0.032为lml氢氧化钠滴定液（lmol/L)相当的二氧化硫的质量，g 4.7 重金属及有害元素 照铅、镉、砷、汞、铜测定法（通则2321原子吸收分光光度法或电感耦合等离子体质谱法）测定，铅不得过5mg/kg；镉不得 过1mg/kg；砷不得过2mg/kg；汞不得过0.2mg/kg；铜不得过20mg/kg。 4.7.1 仪器与试剂：2%硝酸溶液、1%磷酸二氢铵、0.2%硝酸镁、电热板、消解罐、石墨炉原子化器等。 1.铅的测定（石墨炉法） 4.7.2 测定条件 参考条件：波长283.3nm，干燥温度100～120℃，持续20 秒；灰化温度400～750℃，持续20～25秒；原子化温度1700～～2100℃， 第 4 页 共 10 页
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持续4～5秒。 铅标准贮备液的制备 精密量取铅单元素标准溶液适量，用2%硝酸溶液稀释，制成每1ml含铅（Pb）1μg的溶液，即得（0～5℃贮存）。 标准曲线的制备 分别精密量取铅标准贮备液适量，用2%硝酸溶液制成每1ml分别含铅0ng、5ng、20ng、40ng、60ng、80ng的溶液。分别精密量取1ml，精密加含1%磷酸二氢铵和0.2%硝酸镁的溶液0.5ml，混匀，精密吸取20μ1注入石墨炉原子化器，测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。 供试品溶液的制备 A法 取供试品粗粉0.5g，精密称定，置聚四氯乙烯消解罐内，加硝酸3～5ml，混匀，浸泡过夜，盖好内盖，旋紧外套，置适宜的微波消解炉内，进行消解（按仪器规定的消解程序操作）。消解完余后，取消解内罐置电热板上缓缓加热至红棕色蒸气挥尽，并继续缓缓浓缩至2～3ml，放冷，用水转入25ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。同法同时制备试剂空白溶液。 B法 取供试品粗粉1g，精密称定，置凯氏烧瓶中，加硝酸-高氯酸（4:1）混合溶液5～10ml，混匀，瓶口加一小漏斗，浸泡过夜。置电热板上加热消解，保持微沸，若变棕黑色，再加硝酸-高氯酸（4 : 1）混合溶液适量，持续加热至溶液澄明后升高温度，继续加热至冒浓烟，直至白烟散尽，消解液呈无色透明或略带黄色，放冷，转入50ml量瓶中，用2%硝酸溶液洗涤容器，洗液合并于量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。同法同时制备试剂空白溶液。 C法 取供试品粗粉0.5g，精密称定，置瓷坩埚中，于电热板上先低温炭化至无烟，移入高温炉中，于500℃灰化5～6小时（若个别灰化不完全，加硝酸适量，于电热板上低温加热，反复多次直至灰化完全），取出冷却，加10%硝酸溶液5ml使溶解，转入25ml量瓶中，用水洗涤容器，洗液合并于量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。同法同时制备试剂空白溶液。 测定法 精密量取空白溶液与供试品溶液各1ml，精密加含1%磷酸二第 5 页 共 10 页
YL-60050水蛭原料检验操作规程
