pIRES2-EGFP-Aβ342重组质粒的构建及其在N2a细胞中的表达

pIRES2-EGFP-Aβ342重组质粒的构建及其在N2a细胞

中的表达

杨洪梅;吴江;杨立彬;姚兰;李树蕾

【期刊名称】《中风与神经疾病杂志》 【年(卷),期】2012(029)004

【摘要】目的 构建重组质粒pIRES2-EGFP- Aβ42,转染小鼠神经母细胞瘤Neuro-2a细胞,建立稳定表达Aβ42的Neuro-2a细胞系,为体外研究阿尔茨海默病提供新的途径.方法 将质粒pGEMT-Aβ42上的Aβ42基因酶切后,与真核表达质粒pIRES2-EGFP连接,构建重组质粒pIRES2-EGFP-Aβ42.酶切鉴定正确后,采用脂质体介导法转染Neuro-2a细胞,800mg/L G418筛选4w,后续培养G418浓度维持在200mg/L.扩增细胞以低密度培养,HE染色观察细胞形态,免疫组织化学染色法检测Aβ42的表达.结果 酶切鉴定显示重组质粒pIRES2-EGFP- Aβ342构建正确；pIRES2-EGFP-Aβ42转染Neuro-2a细胞,经G418筛选后扩增的细胞均表达绿色荧光蛋白,呈现绿色荧光；免疫组织化学染色显示经G418筛选后的细胞表达Aβ42；HE染色结果显示低密度培养条件下,细胞内表达的Aβ42未引起对细胞形态和增殖能力的明显改变.结论 成功构建重组质粒pIRES2-EGFP-Aβ42,获得稳定表达Aβ42的细胞系. 【总页数】3页(309-311)

【关键词】Aβ42;重组质粒;阿尔茨海默病 【作者】杨洪梅;吴江;杨立彬;姚兰;李树蕾

【作者单位】吉林大学白求恩第一医院神经科,吉林长春130021;吉林大学白求恩第一医院神经科,吉林长春130021;吉林大学白求恩第一医院儿科,吉林长春