匹鲁卡品癫痫模型慢性期大鼠海马苔藓纤维出芽的观察

匹鲁卡品癫痫模型慢性期大鼠海马苔藓纤维出芽的观察

陈丽丽 黄 靓妹 詹 红艳 曹亦宾

【摘 要】【摘要】 目的 观察腹腔注射匹鲁卡品后大鼠痫性发作及海马苔藓出芽。方法 Wistra大鼠60只随机分为模型组和对照组，每组30只，均进行Nissl染色及Timm银染。并于实验当天行脑电图检查。结果 腹腔注射匹鲁卡品后大鼠可见急性癫痫发作，观察慢性期自发性发作。Nissl染色示模型组各区评分两两比较，结果示CA3、门区与CA1区神经元缺失差异有统计学意义(P＜0.05)。Timm银染示2组苔藓纤维出芽Timm银染颗粒评分比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 腹腔注射匹鲁卡品简单复制了人类癫痫的基本病理特征，是研究癫痫的一种简便方法。 【期刊名称】河北医药 【年(卷),期】2011(033)013 【总页数】3

【关键词】【关键词】 癫痫;匹鲁卡品;苔藓纤维，海马

实验动物模型是研究癫痫的重要手段。研究发现，腹腔注射匹鲁卡品(pilocarpine，PILO)是诱导癫痫发作的一种简单方便的动物模型［1，2］。PILO通过同时激动乙酰胆碱和谷氨酸受体导致大鼠癫痫发作。发作后可引起分为3个阶段的行为和脑电图变化:急性期:边缘性癫痫持续状态(status epilepsy，SE)可持续至24 h;静止期:脑电图(EEG)和行为基本正常，4～42 d;慢性自发性复发性发作(spontaneous recurrent seizures，SRS):类似于复杂部分性发作的患者，每只动物发作2～3次/周［3］。长期发作可引起类似人类颞叶癫痫的病理改变，如神经元缺失、胶质细胞增生、苔藓纤维出芽等［4，5］。因此，

该模型已作为理想的动物模型之一，用于癫痫的实验研究。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康雄性成年Wistra大鼠60只，体重200～250 g，由河北联合大学动物实验部提供。随机分为2组，癫痫模型组(模型组)30只;0.9%氯化钠溶液对照组(对照组)30只。均进行Nissl染色及Timm银染。

1.2 药品 PILO由美国SIGMA公司提供，硝酸银由广州市立新化工厂生产，戊巴比妥钠由北京化工厂生产，焦油紫(Crestyl Violet)由美国SIGMA公司生产，氢醌由湖北大学化工厂生产。

1.3 动物模型制作 大鼠腹腔注射PILO 350 mg/kg，注入前30 min腹腔注入东莨宕碱1 mg/kg，以拮抗其外周胆碱能反应;注射后根据Racine［6］制定的标准判定是否有癫痫发作，并于实验当天行EEG检查。对照组大鼠腹腔注等量0.9%氯化钠溶液，观察有无癫痫发作，也于实验当天行EEG检查。Racine标准:0级无惊厥、Ⅰ级面部阵挛、Ⅱ级面部阵挛+节律点头、Ⅲ级面部阵挛+节律点头+前肢阵挛、Ⅳ级面部阵挛+节律点头+前肢阵挛+后肢站立、Ⅴ级面部阵挛+节律点头+前肢阵挛+后肢站立+跌倒。

1.4 灌注和取材 模型组及对照组用于Nissl染色的大鼠分别于给药后3、7、10、30、60 d 灌注取材;用于 neo-Timm 染色的大鼠分别于 3、7、10、30、60 d 灌注取材。

1.5 Nissl染色 切片置于二甲苯中脱脂3 min后依次放入100%、95%、70%乙醇各3 min加水，蒸馏水漂洗3 min，0.1%Crestyl Violet染色10～20 s，镜下观察背景呈白色或无色;而后依次放入70%、95%、100%乙醇各1～2 min脱水，再移入二甲苯透明至少5～10 min后，中性树胶封片;Olympus光

学显微镜观察，并拍照。半定量评估CA1、CA3、门区神经细胞丢失程度，评分标准［7］0:无损害;1:1% ～10%神经元缺失，伴轻度轴突变性;2:11% ～50%细胞缺失，伴相当多的纤维变性;3:超过50%的细胞缺失，伴密集延长的轴突变性。

1.6 Timm银染 将50%阿拉伯胶60 ml柠檬酸缓冲液10 ml、5.6%氢醌 30 ml、17%硝酸银 1.5 ml于暗室中混合均匀［8］;暗室中将干燥切片浸入新鲜配制的孵育液后，置26℃水浴箱中孵育1 h以上后，倾去孵育液，流水冲洗15～20 min;切片干燥后，行Nissl复染(同前)，中性树胶封片;光镜下行齿状回颗粒上区Timm银染苔藓纤维出芽评分，评分标准［9］见表1。

1.7 统计学分析 应用SPSS 13.0统计软件，每只大鼠的各项数据均采用盲法对每只动物的5张切片进行平均后产生，计量资料以±s表示，半定量评分比较采用秩和检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 动物行为学观察及脑电图 模型组:PILO给药的30只大鼠中，1只死于癫痫持续状态，其余大鼠均可观察到边缘性发作行为表现，即竖立、奔跑、湿狗样抖动，继发以面部自动症如眨眼、咀嚼及点头。按Racine标准，Ⅱ～Ⅲ级发作2只，Ⅳ～Ⅴ级发作26只，未发作1只，每次发作持续约40 s，连续5～24 h。给药3 d后及60 d内行为表现呈慢性复发性痫性发作，Ⅱ～Ⅲ级，2～3次/周，表现为前腭阵挛、咀嚼，单肢阵挛等，每次持续约20～30 s。模型成功率为93%。Ⅳ级以上脑电图均可见癫痫波(图1)。对照组:腹腔注射0.9%氯化钠溶液，30只大鼠未观察到边缘性发作行为表现及癫痫发作。

2.2 Nissl染色 正常大鼠CA3、CA1区有大量致密锥体细胞，齿状回门区有中