多索茶碱缓释片在Beagle犬体内药代动力学研究
郭 泉
【摘 要】摘要：目的 进行受试制剂多索茶碱缓释片与参比制剂多索茶碱片在Beagle犬体内的药代动力学研究，明确其是否具有缓释特征，为临床研究提供依据。方法 采用两制剂两周期交叉试验方法，12只Beagle犬分别经口给予受试制剂和参比制剂400 mg，采用LC-MS法测定各时间点血浆中多索茶碱的浓度，药代动力学参数经DAS 2.0统计软件计算获得。结果 受试制剂与参比制剂药代动力学参数：Cmax分别为(4.9±0.6) 和（8.4±2.1）μg/mL，Tmax分别为（2.5±0.5）和（1.7±0.4）h，T1/2分别为（1.4±0.4）和（1.0±0.3）h，AUC0-12分别为（14.0±1.7）和（14.4±2.9）μg/mL×h。受试制剂在达峰浓度上明显小于参比制剂，达峰时间延迟，半衰期延长，具有缓释制剂特征。结论 受试制剂多索茶碱缓释片具有缓释特征。 【期刊名称】医学信息 【年(卷),期】2017(030)002 【总页数】3
【关键词】多索茶碱；Beagle犬；药代动力学；缓释；液相色谱-串联质谱 多索茶碱（doxofylline）是一种新型平喘镇咳药，直接作用于支气管和肺血管平滑肌，扩张支气管和肺血管。多索茶碱通过抑制平滑肌细胞内磷酸二酯酶起作用，增加细胞内cAMP水平，从而松弛平滑肌。高浓度多索茶碱可抑制细胞内组胺的释放。与传统药物茶碱和氨茶碱相比，疗效高且毒性低，治疗效果是氨茶碱的10～15倍[1-2]。多索茶碱国内现有剂型有片剂、胶囊剂和注射剂，均为速释型制剂，未见缓释制剂上市，本品多索茶碱缓释片采用亲水凝胶骨架
技术，延缓多索茶碱的释放，延长多索茶碱在体内的半衰期，从而达到给药期间有效保持有效血药浓度，减小血药浓度峰谷波动，增加治疗指数的目的。 该研究参照《化学药物非临床药代动力学研究技术指导原则》[3]要求，通过LC-MS法观察多索茶碱缓释片在Beagle犬体内药代动力学情况，以了解多索茶碱缓释片在Beagle犬体内吸收规律，为其进一步研究与开发提供实验依据。
1 资料与方法
1.1 实验动物 Beagle犬普通级，10.0～12.0 kg，共12只，雄性，购于苏州工业园区爱尔麦特科技有限公司。
1.2 仪器与试剂 LC/MS-2010EV液相质谱联用仪（日本岛津公司）；XW-80A微型旋涡混合仪（上海沪西分析仪器厂）；XS105分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；Milli-Q A－cademic纯水机（上海密理博贸易有限公司）；KQ-250E超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；HGC-24型氮吹仪（北京瑞邦兴业科技有限公司）；16K平衡离心机（珠海黑马医学仪器有限公司）。 多索茶碱缓释片（规格：400 mg/片，批号：20090406，合肥合源药业有限公司）；多索茶碱片（规格：200 mg/片，批号：081201，黑龙江福和华星制药集团股份有限公司）；多索茶碱标准品（批号：100625-200301，中国药品生物制品检定所购买）；内标卡马西平标准品（批号：100142-199503，中国药品生物制品检定所购买）；甲醇（色谱纯，Merck公司）、乙腈（色谱纯，Merck公司）；乙酸乙酯（分析纯，广东汕头市西陇化工厂）；水为自制纯化水。 1.3 方法
1.3.1 色谱与质谱条件 色谱条件：色谱柱：Phenomenex Syneryi 4μ POLAR-RP 150×2.0 mm；流动相：甲醇∶水（0.1%甲酸）=72∶28（V∶V），流速：
0.2 ml/min，柱温：35℃；进样量：10 μl。质谱条件：ESI离子源；CDL Temperature 250℃，Heat Block Temperature 200℃，Detector Voltage 1.7 KV；正离子方式检测，扫描方式为选择离子检测（SIM），用于定量的离子分别为多索茶碱m/z：267.0；内标卡马西平 m/z：237.2，扫描时间：1.00 s。 1.3.2 试验设计 12只Beagle犬随机分为两组，采用双周期两制剂双交叉试验设计，第一组先服用受试制剂后服用参比制剂，第二组先服用参比制剂后服用受试制剂。服药前禁食过夜（12 h以上），于给药当日清晨空腹经口给予受试制剂多索茶碱缓释片1片或参比制剂多索茶碱片2片，并用100 ml温开水灌送，分别于给药前（0 h）和给药后10 min、20 min、30 min、45 min、1 h、1.5 h、2 h、2.5 h、3 h、4 h、5 h、6 h、8 h、10 h、12 h从犬后肢静脉取血2 ml，放入试管中，静置30 min左右，3000 rpm离心15 min，取血浆于离心管中，-70℃冷冻待测。服药后2 h可饮水；间隔1 w两组交叉服药，第二周期采血时间点与第一周期相同。
1.3.3 样品处理方法 精密量取血浆100 μl置于空白离心管中，加入内标卡马西平溶液（1.515 μg/ml）10 μl，涡旋 30 s，再加入1 ml乙酸乙酯，涡旋3 min，14000 rpm离心10 min，提取有机层，N2下吹干，500 μl流动相复溶，10 μl进样。
1.4 统计学处理 标准曲线采用线性回归分析，药代动力学参数采用DAS 2.0软件计算。
2 结果
2.1 方法学验证
2.1.1 专属性 取空白血浆，除不加内标外，按1.3.3项下操作，获得空白样品色
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