乳腺良恶性肿瘤组织中CD44的表达及其与淋巴管生成的关系

乳腺良恶性肿瘤组织中CD44的表达及其与淋巴管生成的

关系*

王 倩，劳淑贞，朴金松，高蔚樱，赵 凯，张东辉，谭小军，罗 凯

【摘 要】摘 要:目的 研究细胞黏附分子44(CD44)在乳腺良恶性肿瘤组织中的表达及其与淋巴管生成的关系，探讨其在鉴别诊断中的应用价值。方法 收集2005～2015年广州医科大学附属肿瘤医院乳腺肿瘤患者组织样品75例(均为女性)并分为良性肿瘤组、乳腺浸润性导管癌淋巴结转移组和未转移组，每组各25例。免疫组织化学法(IHC)检测CD44在各组患者肿瘤组织样品中的表达并以CD44作为淋巴管内皮细胞标记物比较各组样品中的淋巴管生成情况。生物信息分析验证研究结果。结果 在良性肿瘤组、乳腺浸润性导管癌淋巴结转移组和未转移组中，CD44的IHC评分结果分别为0.60±0.82，3.16±2.70和3.52±2.47，乳腺浸润性导管癌淋巴结转移组和未转移组的CD44表达水平均高于乳腺良性肿瘤组，差异具有统计学意义(F=13.52，P＜0.0001)。以CD44作为淋巴管内皮细胞特异性标记物可有效辅助三组样品的淋巴管生成计数。在乳腺良性肿瘤组、乳腺浸润性导管癌伴淋巴结转移组和未伴淋巴结转移组中，淋巴管生成数分别为4.08±2.43，13.80±13.54和12.72±13.69，乳腺浸润性导管癌淋巴结转移组和未转移组的淋巴管生成数均高于乳腺良性肿瘤组，差异具有统计学意义(F=4.94，P=0.0097)。生物信息分析结果也显示CD44在乳腺癌中的表达较正常乳腺增加。结论 乳腺癌的发生与CD44表达以及淋巴管的生成有关。CD44有望成为乳腺良性肿瘤与乳腺癌的辅助鉴别诊断指标，同时其也可作为乳腺淋巴管内皮细胞的特异性标记物。 【期刊名称】现代检验医学杂志

【年(卷),期】2018(033)004 【总页数】4

【关键词】关键词:乳腺肿瘤;CD44;淋巴管生成;免疫组织化学

* 基金项目:国家自然科学基金(No.81772825)，广州市卫计委医药卫生科技项目(No．20171A011320)。

乳腺癌是严重威胁女性健康的重要恶性肿瘤，在中国其发病率逐年升高且发病年龄呈现年轻化趋势，因此寻找新的鉴别诊断指标来尽早诊断乳腺癌对于乳腺癌的防治具有重要意义。同时，乳腺癌的侵袭转移是导致预后不良的重要因素，而淋巴转移是乳腺癌最重要的转移途径之一。相关研究［1］表明乳腺癌的淋巴转移与淋巴管生成密切相关，所以检测淋巴管生成可有效预测乳腺癌淋巴转移状态。然而因缺乏淋巴管内皮细胞特异性标记物导致淋巴管生成与毛细血管在镜下难以区分，从而影响了准确的淋巴管生成检测［2］。细胞黏附分子44(celladhesion molecule-44，CD44)是一种跨膜透明质酸受体，其不仅介导细胞间或细胞与基质间的黏附，而且其也参与了细胞间的信号传导［3］。近来研究［4，5］表明CD44参与调节了乳腺癌的发生与转移过程，同时其还参与了淋巴管内皮细胞的增殖过程。那么CD44是否可作为乳腺癌的鉴别诊断指标和淋巴管内皮细胞特异性标记物，目前相关研究较少。该研究拟采用免疫组织化学法检测CD44在乳腺癌和良性乳腺肿瘤的肿瘤组织和淋巴管上皮细胞中的表达情况，以探讨CD44在乳腺良恶性肿瘤发生发展中的作用以及其作为乳腺癌辅助鉴别诊断指标和淋巴管内皮细胞标记物的应用价值。

1 材料与方法

1.1 研究对象 收集2005年1月～2015年12月广州医科大学附属肿瘤医院乳

腺肿瘤患者存档蜡块75例，均为女性，平均年龄46.30±11.15岁。其中乳腺良性肿瘤组(乳腺腺病与纤维腺瘤)25例，均为女性，平均年龄34.32±5.46岁;乳腺浸润性导管癌伴淋巴结转移组25例，均为女性，平均年龄48.40±10.85岁;乳腺浸润性导管癌不伴淋巴结转移25例，均为女性，平均年龄49.80±8.41岁。所有患者术前均未接受过化疗与放疗。

1.2 试剂和仪器 兔抗人CD44单克隆抗体购自上海基因公司，SP免疫组织化学试剂盒与DAB显色剂购自丹麦DAKO公司，显微镜购自德国徕卡公司。 1.3 实验方法

1.3.1 HE染色:石蜡切片65℃烤片1～2h，二甲苯和乙醇脱蜡至水，苏木素染色10 min，流水冲洗去余色，0.7 g/dl盐酸乙醇分化5 s，流水冲洗15 min至切片变蓝，95 ml/dl乙醇30 s，酒精性伊红染色 30 s，95 ml/dl乙醇 30 s，95 ml/dl乙醇 30 s，无水乙醇30 s，无水乙醇30 s，石碳酸二甲苯30 s，二甲苯30 s，中性树胶封片。

1.3.2 免疫组织化学染色:将厚5 μm的石蜡切片附于防脱玻片上，65℃烤片1～2h，二甲苯和乙醇脱蜡至水;抗原修复:枸橼酸缓冲液，热修复20 min，PBS洗3次，每次5 min;3 ml/dl双氧水，室温10 min，PBS洗3次，每次5 min;滴加山羊血清封闭液，室温20 min，甩去多余液体;切片滴加生物素化一抗，4℃过夜，PBS洗3次，每次5 min;切片滴加生物素化二抗，37℃20 min，PBS洗3次，每次5 min;切片滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，37℃20 min，PBS洗3次，每次5 min;切片滴加DAB工作液，室温孵育5～10 min;用蒸馏水冲洗终止显色，苏木精复染;梯度酒精脱水，二甲苯透明，封片胶封片;光学显微镜下进行图像分析。