总蛋白（双缩脲法）作业指导书 1：概述
血清蛋白质是各种蛋白的复杂混合物。可利用不同的方法将其分离。血浆中的白蛋白、a1、a2、β球蛋白，纤维蛋白原，凝血酶原和其它凝血因子等均由肝细胞合成。γ球蛋白主要来自浆细胞。当肝脏发生病变时，肝细胞合成蛋白质的功能减退，血浆中蛋白质即会发生质和量的变化。临床上用各种方法检测血浆蛋白的含量来协助诊断肝脏疾患，并作为疗效观察，预后判断的指标。 2标本的收集
新鲜无溶血标本，血清或血浆样本均不溶血。血浆样本只能采用肝素或EDTA抗凝。样本在4摄氏度可稳定7天。采血前病人应禁食12小时，采集静脉3ml,待凝固后（最好放在37摄氏度水浴箱内45分钟）通常为加抗凝剂的血液在30-60分钟凝血析出血清。3000r/min离心5-10分钟，分离出血清备用。不建议采用血浆标本。 3：方法原理
本试剂采用双缩脲反应方法，即在碱性溶液中蛋白质分子中的肽键与两价铜离子反应生成蓝紫色络合物，其中每个铜离子与五六个肽键络合。在试剂中加入碘化物有助于防止碱性
铜络合物的自动还原。反应生成蓝紫色络合物与样本中总蛋白浓度成正比，通过测定52-560nm处吸光度值的变化，即可计算出样本中总蛋白的浓度。 4剂来源，配置及储存 试剂来源：迪瑞
试剂配置：试剂一和试剂二均为液体试剂，可直接使用。启用后在2-8度可稳定30天。若试剂混浊，或以蒸馏水为空白在540nm处的光吸收值低于0.15A,应予丢弃。 试剂储存：试剂避光储存2-8摄氏度可稳定至标签所示失效期。 5分析仪器
CS-600B全自动生化分析仪
分析参数：样品量5 u/l 试剂量：250 u/l
测光点0--41 测定模式：1点终点法 正反应
分析波长：546nm/700nm(主波长/副波长)
6计算方法
总蛋白浓度（g/L）=样本管吸光度×校准液浓度（g/L）
校正管吸光度
7 线性范围：本实验的线性范围：0---150g/L
8 新生儿 46~70g/L 7月~2周岁 51~73g/L 1~2周岁 56~75g/L >3周岁 60--83g/L
9 失控控理
1：立即重测同一质控品，如重测后结果仍不再允许范围，请进行下一步。
2：新开一瓶质控品，重测失控项目，如新开的质控血清结果正常，那么原来质控血清可能过期或在室温防止时间过长而变质，如结果仍不再允许范围，则进行下一步。 3：进行仪器维护，重测失控项目。检查仪器状态，查明光源是否更换，比色杯是否需要清洗或更换？对仪器进行清洗等维护。另外还要检查试剂，此时可更换试剂已查明原因。如果结果仍不再允许范围内，则进行下一步。
4：重新校准。重测失控项目。用新的校准液校准仪器，排除校准液的原因。
5：请专家帮助。如果前五步都为能得到在控结果，那可能是仪器或试剂已查明原因，只有和仪器或试剂厂家联系请求他们的技术支援。 10 注意事项
1:试剂和样本用量可根据不同仪器要求按比例改变。
2：如测试结果超出线性范围，样本应稀释后测试，调整因子数或将结果乘以稀释倍数。
3：结果的准确性仪器校正和测定温度，时间的控制。 4：若试剂混浊或以水为空白在540nm处吸光度值大于0.15A时，则不能使用。
5：由医生根据临床症状和其他实验结果做出临床诊断。 11:临床意义 血清总蛋白增高：
（1）血液浓缩，导致总蛋白浓度相对增高：严重腹泻、呕吐、高热时急剧失水，血清总蛋白浓度可明显升高。休克时，由于毛细血管通透性增加，血液中水分渗出血管。血液可发生浓缩，慢性肾上腺皮质功能减退的患者，由于丢失钠的同时伴随水的丢失，血浆也可出现浓缩现象。
（2）血浆蛋白质合成增加：主要见于球蛋白合成增加，多发性骨髓瘤患者医`学教育网搜集整理。 血清总蛋白降低：
（1）血液稀释，导致总蛋白浓度相对降低：如静脉注射过多低渗溶液或因各种原因引起的钠、水潴留。
（2）摄人不足和消耗增加：食物中长期缺乏蛋白质或慢性胃肠道疾病所引起的消化吸收不良，因患消耗性疾病，如严重结核病，甲状腺功能亢进，恶性肿瘤等，均可造成血清蛋白浓度降低。
（3）蛋白质丢失：严重烧伤时大量血浆渗出，大量失血，肾病综合征时大量蛋白尿，溃疡性结肠炎时肠道长期丢失一定量的蛋白质，这些病理改变均可使血清总蛋白浓度降低。
总蛋白双缩脲法作业指导书
