间皮素RNAi重组慢病毒载体的构建和鉴定
王莉;吴小华;李娜
【期刊名称】《第四军医大学学报》 【年(卷),期】2007(028)024
【摘要】目的:针对间皮素(MSLN)构建RNAi重组慢病毒质粒并用慢病毒包装,探讨MSLN功能.方法:根据MSLN基因信息,用慢病毒质粒载体pRNAT-U6.2/Lenti构建了三个携带小干扰序列和一个阴性对照序列的重组质粒,转染OVCAR-3细胞后,检测RNA干扰效率,选择干扰效率高的质粒载体进行慢病毒包装,并检测病毒滴度,用慢病毒感染细胞再次检测RNA干扰效率和对细胞粘附功能的影响.结果:测序结果证明四种质粒载体的插入序列完全正确.脂质体转染重组慢病毒质粒pRNAT-siRNA3的RNA干扰效率最高,为67.5%.鉴定慢病毒包装成功,病毒滴度为1×108ifu/mL.pRNAT-siRNA3慢病毒感染细胞的mRNA干扰效率为78%,pRNAT-siRNA3慢病毒干扰组细胞粘附率为(15.1±1.3)%明显低于阴性对照组(33.4±8.2)%和空白对照组(30.0±5.8)%,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:pRNAT-siR-NA3慢病毒的感染能显著抑制OVCAR-3细胞MSLN表达以及粘附能力.MSLN RNAi重组慢病毒质粒载体的制备成功为进一步研究MSLN功能和用慢病毒进行基因治疗建立了一个良好的平台.
【总页数】4页(2217-2220)
【关键词】间皮素;慢病毒属;RNA干扰;卵巢肿瘤;细胞粘附 【作者】王莉;吴小华;李娜
【作者单位】河北省人民医院妇产科;河北医科大学附属第四医院妇产科,河北,
石家庄,050011;河北医科大学附属第四医院妇产科,河北,石家庄,050011 【正文语种】中文
【中图分类】Q784;R737.31 【相关文献】
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间皮素RNAi重组慢病毒载体的构建和鉴定
