实验一 食用菌母种制作
、目的要求：
1、了解母种培养基制作过程，理解灭菌原理； 2、掌握母种培养基的制备方法；
3、了解无菌操作基本原理，掌握母种的无菌接种培养方法。 4、了解和掌握食用菌组织分离法的方法步骤； 5、熟练分离出栽培用菌种。
、主要仪器设备及药品材料： 灭菌锅、超净工作台、酒精灯、电炉、铝锅、漏斗、纱布、
菜刀、砧板、
烧杯、捆扎绳、硅胶试管塞、试管(18x180mm、手术刀、镊子、75%酉精、马 铃薯、葡萄糖、琼脂、平菇子实体。
三、实验步骤与方法 :
①培 养基 的制作
1 PDA 培养基配方
马铃薯 200克,葡萄糖 20克,琼脂 20克,水1000毫升.
2. 母种培养基的配制
(1) 熬制。马铃薯洗净，挖芽去皮。称取 200 克，切成玉米大小颗粒或薄 片。量筒
量取 1 000毫升水，铝锅中煮沸后记时 30分钟。四层纱布过滤于量杯 中。滤液倒入锅中文火加热，加入葡萄糖和琼脂，不断搅拌，直到琼脂溶化。 补足水量至 1000 毫升。
(2) 分装试管。将熬制的培养基用小漏斗趁热分装。培养基高度为试管长 度的 1/5 左
右，注意避免培养基沾于试管口外。分装完成后，盖紧硅胶塞。
(3、捆把。7支试管为一捆，用牛皮纸包裹试管口，用捆扎绳扎紧。贴上 标签，准备灭菌。
( 4 、灭菌。注意加足水量和排气，灭菌完成后降压不能太快。
(5 、摆斜面，培养基长度约为试管长度的 1 /2 。斜面试管上覆盖洁净的厚 毛巾或几层纱布，防止试管内产生过多的冷凝水
①菌种分离与培养
（1）种菇选择。选取无杂菌感染，无病虫害，出菇均匀，适应性强的子 实体，要
求个体健壮，朵大肉厚，外形规整，出菇早，约七八成熟的新鲜子 实体。子实体采收后切去大部分菌柄，放入干净器皿内备用。
（2）母种分离（组织分离法） 。在分离前用 75%的酒精棉球擦菇体进行表 面消毒，在超净工作台内将子实体撕开， 用消毒刀片在菌盖与菌柄交接处的 组织上取一小块（绿 豆大小） 移至试管斜面培养基的适当位置， 迅速塞上硅 胶塞。将分离的试管放在室内避光培养 7-8 天，检查菌丝生长情况。
四、实验结果
每人制作平菇母种一支。记录母种菌丝的生长情况。
五、作业
1. 食用菌菌种分离有哪些方法？实际生产中最常用的方法是哪一种？该 方法有何优
点？
2. 组织分离法制作母种成功的关键是什么？在操作中如何避免母种制作 失败？
实验二 食用及药用菌原种制作技术
目的要求：
1、了解原种培养基的配制原理及过程；
2、掌握玉米粒原种的制作方法。
重点与难点 :
重点: 母种培养基制作过程 ; 无菌操作 ; 食用菌组织分离法制作菌种 . 难点 : 食用菌组织分离法制作菌种 .
教学方法与手段 : 本次课主要采取讲授法和讨论法，在学生实验过程中辅以个别指导进行教 学。
实验内容 :
1、按比例计算、称取各组分； 2、添加、混合均匀各组分； 3、培养料水分、 pH 调节、装袋； 4、原种培养基灭菌； 5、转接、培养原种。 6、原种质量检查
主要仪器设备药品材料： 灭菌锅、超净工作台、酒精灯、接种铲、原种瓶、橡皮筋、塑料环、高锰 酸钾、甲醛、 5%石炭酸、 75%酒精、平菇母种。
实验步骤
一． 原种培养基的制备
1. 选定配方。玉米 97%，碳酸钙 2%，石膏粉 1%，PH6.5-7.0 。
2. 培养基配制。选择无病虫害的的玉米粒，用清水冲洗干净，浸泡 40 小时左右。
加水超过玉米粒表面，煮开锅后，小火再煮 5-30 分钟， 使玉米粒充分煮透（胀而不破，切开后无白心） 。用清水冲洗冷却， 淋去谷粒表面水份。加入碳酸钙和石膏粉，充分搅拌均匀备用。
3. 装瓶封口。将配制好的培养基装入原种瓶中。将玉米粒培养基装至 低于瓶肩
处。做到培养基均匀一致，松紧适度，料面平整，擦净瓶 口内外壁。塞上棉塞，外面用一层牛皮纸包好。
4. 灭菌。分装好的原种瓶在当天灭菌，避免培养基发霉变质。采用高 压蒸汽灭
菌。灭菌压力 1.4-1.5Kg/cm 。灭菌时间为 1.5-2 小时。 冷却至30 °C以下待用。
二． 接种
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1. 超净工作台消毒灭菌。将灭菌后的原种瓶及接种用的所有用具（酒
精灯，接种铲等）放入接种场所，进行消毒灭菌。
2. 接种。将平菇母种试管外壁表面消毒后放入超净工作台中。点燃酒
精灯，用酒精棉球再次对试管外壁表面消毒，特别是管口处，去下 棉塞后，试管口在火焰上烤一下，然后用经火焰灭菌并已冰凉的接 种铲将母种斜面分成 4-6 份，将其固定在接种架上，注意管口始终 在酒精灯火焰形成的无菌区内（管口离火焰 1-2 厘米）。然后左手 持原种瓶，右手取下棉塞，瓶口在火焰上烤一下，用接种铲取一份 母种迅速准确的放入料瓶内的接种穴处，棉塞过火后塞好，包上包 头纸。如此反复，每支母种可扩接原种 4-6 瓶。
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三． 培养。
将接种后的原种瓶放入消毒过的培养室培养，培养温度为
25C。定期
检查杂菌发生情况，从培养 3-5 天开始每天检查一次，当菌丝封住料 面并向下深入 1-2 厘米时，可改为每周检查一次，发现污染的瓶立即 淘汰，并隔离污染源。
四． 原种质量检查
无论麦粒原种还是棉籽壳原种，接种后在 25C左右培养20-40天，菌 种即可长满瓶。品质优良的原种，菌丝洁白、纯净、有食用菌特有的 香味。若出现黄、绿、黑等颜色的毛状物或菌瓶内有酸臭味道。不能 使用，应将其灭菌后远离培养场地处深埋。
作业
1. 食用菌原种培养基主要有哪些？ 2. 制作原种过程中应该注意哪些问题？
实验三 食用及药用菌栽培种制作技术 目的要求：
1、了解栽培种培养基的配制原理及过程； 2、理解好的栽培种培养基对生产的重要性； 3、掌握水在配料中的作用； 4、掌握栽培种制作技术。
重点与难点 :
重点 : 栽培种培养基的配制原理及过程 ; 栽培种制作技术 . 难点 : 水份含量的掌握 .
教学方法与手段 :
本次课主要采取讲授法和讨论法，在学生实验过程中辅以个别指导进行教
实验内容 :
食用菌母种制作实验一
