乳腺癌中的Twist检测及其临床意义
肖雄升;李有柱;陈小东;李建文
【摘 要】目的 通过研究乳腺癌细胞中Twist基因及蛋白的表达情况, 以进一步探讨Twist基因与乳腺癌转移性的关系.方法 分别采用RT-PCR法、链霉亲和素-生物素酶复合物(Strept avidin biotincomplex,SABC) 免疫组织化学方法和Western blot法检测在三种乳腺癌细胞株[非转移性乳腺癌细胞株(MCF-7)、低转移性乳腺癌细胞株(MDA-MB-453)、高转移性乳腺癌细胞株(MDA-MB-231)]中介导EMT 发生的转录因子Twist、上皮性标记基因E-钙黏素(E-cadherin)和间质性标记基因N-钙黏素(N-cadherin)表达的改变情况.结果 (1) MCF-7细胞中,E-cadherin mRNA的表达和蛋白的表达为阳性,Twist、N-cadherin表达为阴性.(2) MDA-MB-453细胞中Twist、N-cadherin表达为阳性,E-cadherin表达为阴性.(3) MDA-MB-231细胞中Twist、N-cadherin表达为阳性,E-cadherin表达为阴性.结论 检测乳腺癌组织中Twist基因和蛋白表达水平有助于判断乳腺癌细胞的恶性程度及转移性,为临床正确判断乳腺癌的转移、分期和选择综合治疗方案提供佐证.
【期刊名称】《广东医学》 【年(卷),期】2010(031)018 【总页数】4页(P2351-2354)
【关键词】Twist;E-cadherin;N-cadherin;乳腺癌;肿瘤转移 【作 者】肖雄升;李有柱;陈小东;李建文
【作者单位】广东医学院附属医院,血管甲状腺乳腺外科,广东湛江,524001;广东医学院附属医院,胃肠外科,广东湛江,524001;广东医学院附属医院,血管甲状腺乳腺外科,广东湛江,524001;广东医学院附属医院,血管甲状腺乳腺外科,广东湛江,524001 【正文语种】中 文 【中图分类】医药卫生
广东医学2010 年 9 月 1在 31 在第 18 J剖 Guangdong Medical
JournalSep.2010,Vol.31,No.18 ·2351· 乳腺癌中的 Twist 检测及其临床意义＊肖雄升 l ，李有柱2 ，陈小东 l ，李建文 l广东医学院附属医院 1 血管甲状腺乳腺外科， 2 胃肠外科（广东湛江 524001)｛摘要］目的通过研究乳腺痕细胞中 Twist 基因 }.l蛋白的表达情况，以进一步探讨 Twist 基因与乳腺痕转移性的关系方法分别采用 RT- PCR 法、链霉亲和亲一生物素酶复合物
（ Streplavidinbiotincomplex, SABC ）免疫组织化学方法和 Western blot 法检测在三种乳腺癌细胞株［非转移性乳腺痕细胞株（ MCF-7 ）、低转移性乳腺癌 细胞株（ MDA- MB-453 ）、高转移性乳腺癌细胞株（ MDA- MB- 231 ）］中介导 EMT 发生的转录因子 Twist 、上皮 性标记基因 E －钙恭亲（ E - cadherin ）和问质性标记基因 N －钙和素（ N - cadherin ）表达的改变情况。 结果 ( I )MCF-7 细胞中， E - cadherinmRNA 的表达和蛋白的表达为阳性，Twist、N - cadherin 表达为阴性。 （ 2) MDA- MB一453细胞中 Twist 、 N - cadherin 表达为阳性， E - cadherin 表达为阴性。（ 3) MDA- MB-231 细胞中 Twist、 N- cadherin 表达为阳性， E - cadherin 表达为阴性c 结论 检测乳腺癌组织中 Twist 基因和蛋白表达水平有助于判断 乳腺癌细胞的恶性程度及转移性，为临床正确判断乳腺癌的转移、分期和选择综合治疗方案提供佐证。 ［关键词 lTwist;E - cadherin;N- cadherin ；乳腺痕；肿癌转移乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之L ，
严重危害 妇女健康，近年来其发病率有逐年上升的趋势，在我国 的一些地区已上升至女性恶性肿瘤发病率之首位门， 并出现发病年龄年轻化的倾向，给乳腺癌的治疗提出 了挑战 。目前研究发现 Tw时能影响肿瘤细胞的调亡，对许多肿瘤的侵袭和转移都有重要影响 2 ，在某些上 皮来源的肿瘤细胞发生上皮细胞向间质细胞转换（ ep- ithelial - mesenchymaltransition, EMT ）时’有 Twist 参与， 同时 Twist 基肉在肿瘤进展中能独立诱导一系列｜同充 质标志物产生 d 本实验通过研究 3 种乳脱癌细胞株 （非转移性、低转移性、高转移性）中 Twist 基因及蛋白 的表达情况，进一步探讨 Twist 基因与乳腺癌转移性的 关系 。寻找联合治疗乳腺癌转移的敏感、特异而有效 的靶基因，为乳腺癌转移的多基冈靶向治疗提供理论 依据。I材料与方法 I.1细胞系与培养 MCF 一 7 （乳腺癌元转移性细胞株）,MDA- MB-453 （乳腺癌低转移性细胞株） ,MDA- MB-231 （乳腺癌高转移性细胞株），均购自中南大学湘 雅医学院细胞库。 MCF -7,MDA-MB -231 、MDA-MB -453 细胞系于 RPMI -1归。培养被中（含 15% 新生小 牛血清，青霉素 100 U/rnL ，链霉素 I 00U/rnL, 0.056%NaHC03 ，调节 pH 值至 7.4 ）置于 37℃、5à2 培养箱中 常规培养，0.25% 膜酶消化传代。1.2细胞总 RNA 提取与 RT- PCRRNA 提取试剂Trizol? 购自 Invilroger】 Life Technologies ；一步法 RT- PCR 试剂盒购自 Promega ；提取细胞总 RNA 后，取2 μgRNA 逆转成 cDNA 后行 PCR 反应 。 PCR 引物由上海 生工生物工程技术服务有限公司合成，将扩增产物进 行I.5% 琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像系统观察结果。＊广东省湛江IJ]科技局基金资助项 LH 编号： i甚科［ 2006]94 号）PCR 引物序列： Twist （扩增产物 277 bp ）上游引物： 5 ’-GGGAGTCCGCAGTCTTACGA- 3 ’，下游寻｜物： 5 ’－ AGACCGAGAAGGCGTAGCTG - 3’; E - cadherin （扩增 产物171 bp ）上游引物： 5 ’－ CGGTGGTCAAAGAGC-CCTTACT- 3 ’，下游引物： 5 ’－ TGAGGGTTGGTG- CAACGTCGTTA3’; N - cadherin （扩增产物 232 hp)上游
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