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慢病毒载体表达系统的研究进展
作者：辛凌翔 常迪
来源：《中国动物保健》2017年第10期
摘要：作为运载工具，慢病毒载体将插入的目的基因导入至宿主细胞内，目的基因由此可于宿主细胞内进行复制或表达，因其具有广阔的宿主范围且能更加有效地引起细胞感染而被视为常用的基因导入方式之一。本文围绕慢病毒载体的构成、慢病毒载体表达系统的优势及演变等，开展相关研究状况的系统综述。
关键词：慢病毒载体；病毒包装；基因表达
慢病毒（Lentivirus）为二倍体RNA病毒，属逆转录病毒科（Retrovidae），其感染特征为经显性或隐性感染后，潜伏期较长，感染动物发病缓，常见的有：HIV（人类免疫缺陷病毒）、FIV（猫免疫缺陷病毒）以及EIAV（马传染性贫血病毒）等。慢病毒于宿主细胞中第一步会通过自身反转录酶作用，结合病毒RNA产生eDNA；第二步是将上一步骤所得eDNA当做模板，由此产生双链DNA；第三步，经过双链DNA环化反应，同时通过病毒整合酶作用，在宿主细胞染色体上依次进行整合与表达翻。 1慢病毒载体的结构
慢病毒载体作为重组逆转录病毒载体的一类，其基础为慢病毒，其病毒基因组内含有关系到病毒活性以及病毒复制的重要序列，去掉此类序列，再根据试验需要，在其基因组骨架中插入目的基因的序列，这样既可以保证其生物安全性，又能达到基因转移的目的。就整个慢病毒载体系统而言，应用率最高的为HIV载体系统，且所获研究成果最多的为HIV-1型载体系统。以HIV-1的基因结构为例，HIV-1属双链RNA病毒，共含9个基因（如图1所示）。 编码病毒结构蛋白的基因主要有gag、pol和env。其中，gag负责编码合成衣壳蛋白、内膜蛋白以及核衣壳蛋白等关键蛋白，pol负责编码病毒复制相关酶，env负责编码病毒包膜糖蛋白。
编码病毒调节蛋白的基因主要有rev和诅t。rev参与调节蛋白的表达，tat参与控制蛋白的转录。LTR为病毒的长末端重复序列，其内存在顺式作用原件，LTR结合tat后能对病毒基因转录起促进作用。vif、vpr、vpu、nef为辅助基因，将辅助基因编码的蛋白当做毒力因子，可用来主导宿主细胞的感染以及识别。此外，在构成上，HIV-1的基因组还提供了病毒整个生命周期涉及到的其他序列结构，诸如包装信号、病毒复制信号等。 2慢病毒载体表达系统的优势
在所有外源基因导入细胞的方法中，应用较为广泛的有DEAE-葡聚糖转染技术、磷酸钙转染技术、聚阳离子-DSMO转染技术、电穿孔技术、显微注射技术、原生质体融合技术等。
慢病毒载体表达系统的研究进展
