南方农业学报JournalofSouthernAgriculture2018，49（9）：1858-1864·1858·南方农业学报ISSN2095-1191；CODENNNXAABhttp://www.nfnyxb.com49卷DOI：10.3969/j.issn.2095-1191.2018.09.25杜仲叶提取物对凡纳滨对虾生长、免疫酶
活性及肝胰腺组织的影响
李军涛1，李金宝2，冼健安1，陈惠琴1，张秀霞1，郑佩华1，鲁耀鹏1，王冬梅1*
（1中国热带农业科学院热带生物技术研究所，海口
571101；2山东龙昌动物保健品有限公司，山东齐河
251100）
摘要：【目的】明确杜仲（Eucommiaulmoides）叶提取物在凡纳滨对虾（Litopenaeusvannamei）饵料中的适宜添加量，为研发高效、无污染、无残留的对虾饵料配方提供参考依据。【方法】以凡纳滨对虾专用饵料为基础饵料，分别添加0.1、0.2、0.3、0.5和0.7g/kg的杜仲叶提取物，进行为期6周的养殖试验，探究饵料中梯度添加杜仲叶提取物对凡纳滨对虾生长性能、免疫相关酶活性及肝胰腺组织结构的影响。【结果】综合凡纳滨对虾的增重率、存活率和肥满度3个指标可知，添加0.3g/kg杜仲叶提取物可有效改善凡纳滨对虾的生长性能和个体存活率，同时降低凡纳滨对虾的饵料系数；随杜仲叶提取物添加量的增加，凡纳滨对虾的超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和酚氧化酶（PO）活性整体上呈先升高后降低的变化趋势，而丙二醛（MDA）水平的变化恰好相反，综合各项指标也是以0.3g/kg添加量的效果最佳；梯度添加杜仲叶提取物对凡纳滨对虾肝胰腺无明显影响，仍保持完整的细胞结构，但其B细胞数量明显增多。【结论】饵料中添加杜仲叶提取物能有效提高凡纳滨对虾的生长性能和免疫酶活性，并增加肝胰腺中具分泌功能的消化酶细胞，具有替代抗生素的潜能，实际生产中的最适添加量为0.3g/kg。
关键词：凡纳滨对虾；杜仲叶提取物；生长性能；免疫相关酶活性；肝胰腺中图分类号：S966.12；S963.739
文献标志码：A
文章编号：2095-1191（2018）09-1858-07
EffectsofEucommiaulmoidesleafextractongrowthperformance，activityofimmune-relatedenzymeand
hepatopancreasinLitopenaeusvannamei
LIJun-tao1，LIJin-bao2，XIANJian-an1，CHENHui-qin1，ZHANGXiu-xia1，ZHENGPei-111*
hua，LUYao-peng，WANGDong-mei
（1InstituteofTropicalBioscienceandBiotechnology，ChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences，Haikou
2
571101，China；ShandongLongchangAnimalHealthProductsCo.，Ltd.，Qihe，Shandong251100，China）Abstract：【Objective】TheappropriatedosageofEucommiaulmoidesleafextractinLitopenaeusvannameidietwasdeterminedtoprovidereferenceforthedevelopmentofhigh-efficiency，pollution-freeandresidue-freeL.vannameidietformula.【Method】TheL.vannameispecialdietswasusedasbasicdiets，E.ulmoidesleafextractsof0.1，0.2，0.3，0.5and0.7g/kgwereaddedtotheL.vannameidietsrespectively，andwerefedforsixweeks.TheeffectsofaddinggradientE.ulmoidesextractinthedietsongrowthperformance，immune-relatedenzymesactivitiesandhepatopancreasstructureofP.vannameiwerestudied.【Result】Accordingtothethreeindexesofweightgainrate，survivalrateandfatnessofP.vannamei，adding0.3g/kgextractofE.ulmoidesleavescouldeffectivelyimprovethegrowthperformanceandindividualsurvivalrateofP.vannamei，andreducethefeedcoefficientandliver-bodyratio.WiththeincreaseofthegradientofE.ul-moidesleavesextract，theactivitiesofsuperoxidedismutase（SOD），catalase（CAT），glutathioneperoxidase（GSH-Px）andphenoloxidase（PO）ofP.vannameiincreasedfirstlyandthendecreased，butthemalonaldehyde（MDA）levelchangedonthecontrary.Theindexespresentedthebestperformancewhenadding0.3g/kgextract.【Conclusion】E.ulmoidesleafex-tractaddingtothedietcaneffectivelyimprovethegrowthperformanceandimmuneenzymeactivityofP.vannamei，andincreasethedigestiveenzymecellswithsecretingfunctioninhepatopancreas.Ithasthepotentialtoreplaceantibiotics.TheoptimumdosageofE.ulmoidesextractintheactualproductionis0.3g/kg.
Keywords：Eucommiaulmoides；Litopenaeusvannameileafextract；growthperformance；activityofimmune-relatedenzyme；hepatopancreas收稿日期：2018-04-17基金项目：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项项目（1630052016011，1630052016021）作者简介：*为通讯作者，王冬梅（1969-），研究员，主要从事水产动物营养与饲料学研究工作，E-mail：wdmei1969@126.com。李
军涛（1987-），主要从事水产养殖生态及毒理学研究工作，E-mail：lijuntao@itbb.org.cn
9期李军涛等：杜仲叶提取物对凡纳滨对虾生长、免疫酶活性及肝胰腺组织的影响
·1859·0引言
【研究意义】凡纳滨对虾（Litopenaeusvanna-mei）又名南美白对虾，是当前世界上养殖产量最高
的三大优良品种之一（熊建华等，2011；姜松等，2018）。我国是凡纳滨对虾的主要养殖国，但一直存在虾苗易发病、养殖成功率低、缺乏高效功能型配合饵料等问题，致使生产上曾大量不规范使用抗生素，导致病原菌产生耐药性的同时给水产品质量安全带来极大隐患。我国经济正处在转型升级的关键时期，加上人民群众消费观念的转变，现已逐渐禁止在动物养殖过程中使用抗生素，因此寻求抗生素替代品成为养殖业的研究焦点，各类饲料添加剂也由化工型逐步转向中药型。【前人研究进展】杜仲（Eucom-miaulmoides）是国家二级珍稀树种，名贵滋补药材，主要以皮入药，种质资源稀缺（冯风和梁志荣，1996）。杜仲皮一般需生长15—20年，而叶的资源相对丰富且易得，在发现其生理功能之前一直被视为废弃物。近年来，国内外专家对杜仲叶的成分Leissetal.，2009）及其药效（李竹等，2004）进行研究，发现杜仲叶提取物中富含绿原酸、多糖及黄酮等有益成分（李冉等，2016），与杜仲皮的成分类似。以杜仲叶代替杜仲皮的可行性已在临床、药理上得到验证（季春，2017），一致认为杜仲叶提取物作为饲料添加剂具有不产生耐药性、基本无毒副作用、资源丰富等特点，具有替代抗生素的潜能，即杜仲叶提取物是一种非常具有开发价值的中药饲料添加剂。在饲料中适量添加杜仲叶提取物对畜禽及鱼类的生产性能均有促进作用，具体表现为促进生长（吕武兴等，2005；胡忠泽等，2006；陈敬佳，2017）、增强非特异性免疫（王轶等，2015；段俊红等，2016）、提高抗应激能力（石英等，2008）和抗氧化能力（林建斌等，2015）、改善肉质等（孙文通，2017）。【本研究切入点】杜仲叶活性成分具有降血糖、降血脂、抗菌、抗病毒、提高免疫力、清除自由基、抗衰老等功能作用（李燕舞等，2017），但至今有关杜仲叶提取物对凡纳滨对虾生长性能、免疫功能及肝胰腺功能的影响鲜见研究报道。拟解决的关键问题】探究基础饵料中梯度添加杜仲叶提取物对凡纳滨对虾生长性能、免疫相关酶活性及肝胰腺组织结构的影响，确定其在凡纳滨对虾饵料中的适宜添加量，为研发高效、无污染、无残留的对虾饵料配方提供参考依据。
1材料与方法
1.1
试验材料
选择苗场健康的凡纳滨对虾虾苗培育至体长
2.5cm左右，随机分为6组，每组设3个重复，每个重复30尾虾，虾苗初始体重0.193±0.002g/尾。杜仲叶提取物由山东龙昌动物保健品有限公司提供，凡纳滨对虾基础饵料购自广东海大集团股份有限公司。在基础饵料中分别添加0.1、0.2、0.3、0.5和0.7g/kg的杜仲叶提取物作为试验饵料，配制前先将杜仲叶提取物充分溶解，采用梯度稀释的方法配制各试验饵料，制好的饵料自然风干，-20℃储存备用，饲喂前须将饵料解冻至室温。1.2养殖管理
2017年5—7月在海南宝莱生物科技有限公司虾苗场进行为期6周的养殖试验。采用长×宽×高为50cm×40cm×40cm的养殖箱进行养殖，水深25cm左右，整个饲养期间保持水质稳定，水温28~33℃，溶氧量在6.0mg/L以上，pH7.8~8.5，氨氮0.02~0.04mg/L，亚硝酸盐0.02~0.04mg/L，盐度15‰~18‰。每天投喂4次饵料，日投饵量为虾总重的5%~8%，根据虾的摄食情况和水温进行适当调节。每次投喂后40min利用虹吸管收集残饵，经烘箱70℃烘干后记录投喂量和残饵量。每2周称重1次，用以矫正投饵率。1.3样品采集
养殖试验结束后禁食24h，测定各组对虾体重，记录对虾尾数。每箱随机抽取6尾对虾，测量其体长和体重，抽取血淋巴，在冰盘上解剖分离肝胰脏和肠道并称重，-80℃保存备用。1.4指标测定
1.4.1生长性能指标
饵料系数=每缸投喂饲料总量/每缸对虾总增重量肥满度（%）=体重/体长3×100肝体比（%）=肝胰脏重/体重×100增重率（%）=（终末虾体总重－初始虾体总重）/
初始虾体总重×100
存活率（%）=终末尾数/初始尾数×1001.4.2免疫相关酶活性指标参照试剂盒（南京建成生物工程研究所）说明测定免疫相关酶活性。1.4.3肝胰腺组织切片制作肝胰腺组织切片委托基尔顿生物科技（上海）有限公司制作。1.5统计分析
试验数据以Excel2010进行统计整理，利用SPSS17.0进行单因素方差分析（One-wayANOVA）和Duncan’s多重比较，并采用Origin8.0制图。
2结果与分析
2.1添加杜仲叶提取物对凡纳滨对虾生长性能的影响
由表1可知，对虾存活率随杜仲叶提取物添加
（【·1860·南方农业学报49卷量的增加呈先升后降的变化趋势，其中0.1、0.2和0.3g/kg组的对虾存活率均显著高于未添加杜仲叶提取物的对照组（P<0.05，下同），并以0.3g/kg组的对虾存活率最高，为94.44%。0.7g/kg组的对虾增重率最低（496.49%），对应的饵料系数（1.940）显著高于其他试验组。随杜仲叶提取物添加量的增加，对虾肥
满度也呈先升后降的变化趋势，其中0.2、0.3、0.5和0.7g/kg组对虾的肥满度显著高于对照组。综合各项生长性能指标，发现杜仲叶提取物在基础饵料中的最适添加量为0.3g/kg。
表1添加杜仲叶提取物对凡纳滨对虾生长性能的影响
Table1EffectsofaddingE.ulmoidesleafextractongrowthpropertiesofL.vannamei
添加量（g/kg）Addingamount
对照组Controlgroup0.10.20.30.50.7
增重率（%）Weightgainrate618.69±17.73ab601.22±40.94ab721.83±25.65a738.66±76.65a653.99±41.24a496.49±39.54b
存活率（%）Survivalrate80.00±1.92b91.11±4.01a92.22±2.22a94.44±2.22a86.67±5.09ab78.89±2.22b
饵料系数Feedcoefficient1.605±0.045b1.657±0.094b1.408±0.045b1.399±0.121b1.538±0.080b1.940±0.124a
肥满度（%）Fullness4.999±0.145b5.086±0.090b5.515±0.076a5.509±0.068a5.655±0.085a5.594±0.101a
肝体比（%）Liver-bodyratio6.240±0.186ab6.298±0.163a5.726±0.197b6.279±0.158a6.183±0.165ab6.079±0.169ab
同列数据后不同小写字母表示差异显著（P<0.05）
Differentlowercaselettersinthesamecolumnrepresentedsignificantdifference（P<0.05）
MDA（mg/mL）2.2添加杜仲叶提取物对凡纳滨对虾免疫相关酶活性的影响
2.2.1对凡纳滨对虾超氧化物歧化酶（SOD）活性的影响饵料添加杜仲叶提取物对凡纳滨对虾肝胰腺和血清中SOD活性的影响如图1所示。无论是肝胰腺SOD活性还是血清SOD活性，对照组与各杜仲叶提取物添加组间的差异均不显著（P>0.05，下同）；血清SOD活性以0.3g/kg组最高，肝胰腺SOD活性则以0.2g/kg组最高。
70.0065.0060.0055.0050.0045.0040.0035.0030.0025.0020.0015.0010.005.000.00
a
对照组Controlgroup0.1g/kg0.2g/kg0.3g/kg0.5g/kg0.7g/kg
abb
ab
ab
kg组的MDA水平显著高于对照组和0.3g/kg组，其他杜仲叶提取物添加组与对照组间差异不显著；在对虾肝胰腺中，0.7g/kg组的MDA水平显著高于对照组和其他杜仲叶提取物添加组。
9.008.007.006.005.004.003.002.001.000.00
血清Serum
肝胰腺Hepatopancreas
b
aabb
ab
ab
对照组Controlgroup0.1g/kg0.2g/kg
a0.3g/kg
0.5g/kg0.7g/kg
bbbbb
SOD（U/mg）abab
aba
abab
b
图2
饵料添加杜仲叶提取物后凡纳滨对虾肝胰腺和血清
中MDA水平的变化情况
Fig.2MDAlevelsinthehepatopancreasandserumofL.van-nameiafteraddingE.ulmoidesleafextract
血清Serum肝胰腺Hepatopancreas
图1
饵料添加杜仲叶提取物后凡纳滨对虾肝胰腺和血清中SOD活性的变化情况
Fig.1SODactivitiesinthehepatopancreasandserumofL.
vannameiafteraddingE.ulmoidesleafextract
同一组织中不同小写字母表示组间差异显著（P<0.05）。图2~图5同Differentlowercaselettersforthesametissuerepresentedsignificantdifferencebetweendifferentgroups（P<0.05）,thesamewasappliedinFig.2-Fig.5
2.2.2对凡纳滨对虾丙二醛（MDA）水平的影响饵料添加杜仲叶提取物对凡纳滨对虾肝胰腺和血清中MDA水平的影响如图2所示。在对虾血清中，0.1g/
2.2.3对凡纳滨对虾过氧化氢酶（CAT）活性的影
响饵料添加杜仲叶提取物对凡纳滨对虾肝胰腺和血清中CAT活性的影响如图3所示。对照组对虾的血清CAT活性显著低于0.1、0.2、0.3和0.5g/kg组，但各杜仲叶提取物添加组间差异不显著，其中以0.2、0.3和0.5g/kg组的CAT活性较高，分别为4.23、4.17和4.22U/mg；在对虾肝胰腺中，对照组的CAT活性显著低于各杜仲叶提取物添加组，以0.2g/kg组的CAT活性最高，达6.20U/mg。
2.2.4对凡纳滨对虾谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性的影响饵料添加杜仲叶提取物对凡纳滨
___________杜仲叶提取物对凡纳滨对虾生长、免疫酶活性及肝胰腺组织的影响<p><br/></p>
