利用ARTP诱变育种技术选育白色金针菇突变菌株
杨 茹，王 范，董鼎才，付祥梅，郭立忠
【摘 要】摘要：本研究首先从市售工厂化栽培的五株白色金针菇菌株中筛选出一株品质优良的菌株AR0作为本次诱变育种的出发菌株。然后利用常压室温等离子体(ARTP)诱变育种技术选育出6株白色金针菇突变株。通过对突变株与出发菌株的抗病性、纤维含量测定及亲缘关系鉴定，结果表明突变株AR12和AR17为抗病性强、纤维含量低的目标新菌株。其优良品质表现如下：突变菌株AR12与出发菌株AR0相比，菌丝体抗P.tolaasii能力提高15.49%，菌丝体纤维含量降低15.82%；突变株AR17与出发菌株AR0相比，菌丝体抗P.tolaasii能力提高1.90%，菌丝体纤维含量降低36.31%。 【期刊名称】青岛农业大学学报（自然科学版） 【年(卷),期】2017(034)004 【总页数】7
【关键词】白色金针菇；ARTP诱变育种；亲缘鉴定
【文献来源】https://www.zhangqiaokeyan.com/academic-journal-cn_journal-qingdao-agricultural-university-natural-science_thesis/02012438322.html
金针菇(Flammulina velutipes)又名毛柄金钱菌、朴菇、冬菇、构菌、金钱菌等,含有丰富的纤维素、蛋白质以及氨基酸等营养物质，其中包含8种人体必需氨基酸且脂肪含量较低，是一种不可多得的高营养食品[1]。其中纤维质可促进新陈代谢，调节胆固醇代谢，降低血浆中胆固醇的含量，并有镇定的作用但是含量过高不仅影响口感，而且不易消化。金针菇中含有丰富的氨基酸，对儿童增长智力有重要作用，所以又叫“曾智菇”。金针菇中含多种功能性蛋白，这
使得其在抗肿瘤、免疫调剂、降低胆固醇、保护肝脏细胞、抗疲劳及延长寿命等方面都有重要作用。因此金针菇具有重要的食用和药用价值。
随着金针菇生产规模的不断扩大，其病害发生也逐年增加并加重。其中黑腐病对金针菇产量及品质有严重影响。黑腐病发病速度快，难根除，很容易变成一种流行病传播到其他菇房[2]。因此，本研究重点选育口感好、抗病能力高的优质菌种。
本研究中根据上海地区食用菌行业金针菇成品菇分级标准分级[4]对各品种子实体进行商品性评价。以此判断是否获得优良品种。
1 实验材料
1.1 菌株来源
由蔬菜市场购买的五个白色金针菇菌株，如表1所示。 1.2 培养基与试剂
PDA固体培养基：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，蒸馏水1 000 mL，pH自然。
牛肉膏蛋白胨培养基：蛋白胨10 g，牛肉浸膏3 g，氯化钠5 g，定容至1 000 mL，pH 7.0。
RM培养基：马铃薯200 g，酵母膏2.0 g，蛋白胨2.0 g，蔗糖20 g，MgSO41.5 g，甘露醇109.32 g，琼脂20 g，蒸馏水1 000 mL，pH自然。 裂解酶：溶壁酶(购自广州微生物所)。
2 实验方法
2.1 出发菌株筛选
2.1.1 五个白色金针菇菌株子实体形态学观察比较
由市场上购买的五株白色金针菇菌株中，每种随机抽取3袋进行子实体观察。 2.1.2 五个白色金针菇菌株子实体水分测定
由购买的白色金针菇中，每种随机抽取3袋进行子实体水分含量测定。从培养料算起，切掉3.5 cm菇根，子实体称重，置于55℃鼓风式烘干箱至恒重，称重。
2.1.3 五个白色金针菇子实体氨基酸和纤维素含量测定
将每种金针菇烘干、粉碎，各取10 g，利用氨基酸分析仪测定氨基酸含量，利用重铬酸钾氧化法测定纤维素含量。
2.1.4 五个白色金针菇菌株菌丝生长速度比较
本实验采用十字交叉法测定菌丝生长速度，具体方法如下：
将五个白色金针菇菌株分别接种于PDA平板上活化。用打孔器取活化的菌块分别放于PDA平板中央，每隔24 h用十字交叉法测量菌落直径，连续测量5 d，每株做5个重复。分析比较五个白色金针菇菌株菌丝生长速度和长势[5-7]。 2.1.5 对五个白色金针菇菌株进行ERIC-PCR鉴定
Ezup柱式真菌基因组DNA抽提试剂盒分别提取五种白色金针菇的全基因组DNA，以基因组为模板，利用通用引物： ERIC1(5’-ATGTAAGCTCCTGGGGATTCAC-3’) ERIC2(5’-AAGTAAGTGACTGGGGTGAGCG-3’)
扩增其共有序列。将扩增结果统计后产生的“0/1”数据表输入NTsys软件系统中，进行聚类分析，并自动生成各菌株的遗传聚类图谱[8]。 2.1.6 五个白色金针菇菌株抗黑腐病病原菌(P.tolaasii)比较
将本实验室保存的黑腐病病源菌接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中活化，吸取
利用ARTP诱变育种技术选育白色金针菇突变菌株
