人骨保护素基因在大肠杆菌中的表达及表达产物的初步活
性分析
刘继中;胡蕴玉;纪宗玲;陈苏民
【期刊名称】《中华外科杂志》 【年(卷),期】2003(041)009
【摘要】目的在大肠杆菌中表达人骨保护素(OPG)与组氨酸的融合蛋白并分析其生理活性. 方法以人骨肉瘤细胞系MG63的mRNA为模板,采用RT-PCR法得到人OPG成熟肽段编码区cDNA,克隆入原核表达载体pRSET-A,转化大肠杆菌感受态细胞BL21, 0.1 mmol/L IPTG诱导表达OPG与6个组氨酸的融合蛋白,经SDS-PAGE及Western blot鉴定蛋白表达,Ni-NTA琼脂糖树脂亲和层析纯化.小鼠骨髓细胞在1,α25(OH)2D3 (10-8 mol/l)及地塞米松(10-7 mol/L)的诱导下在体外分化成破骨细胞样多核细胞,将OPG-6His融合蛋白加入鼠骨髓细胞的培养基中(浓度分别为1 000、1 500 μg/L),计算象牙片上骨吸收陷窝及玻片上的TRAP阳性多核细胞的数量. 结果获得人OPG成熟肽段编码区cDNA,构建原核表达载体pRSET-OPG.转化菌株可高效表达人OPG融合蛋白(融合6个组氨酸),蛋白分子量为46 000,蛋白表达量约为菌体总蛋白的24%,并能与人OPG多克隆抗体特异性结合.纯化的蛋白加入体外培养的小鼠骨髓细胞培养基中,当浓度为1 500 μg/L时,象牙片上骨吸收陷窝及玻片上的TRAP阳性多核细胞的数量均减少(P<0.05),浓度为1 000 μg/L时则无此作用(P>0.05). 结论获得人OPG成熟肽段全长cDNA,并在大肠杆菌中高效表达OPG与组氨酸的融合蛋白.纯化后的蛋白在高浓度下对体外培养的破骨细胞的分化和骨吸收活性具有一定的抑制作用,提示采用原核表达有活性的OPG蛋白还需要进一步的研究和
人骨保护素基因在大肠杆菌中的表达及表达产物的初步活性分析
